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文檔簡介
1、目的:
擬通過觀察人增生性瘢痕成纖維細胞(hypertrophicscar fibroblasts HSFB)經胸腺素β4(thymosin beta4)干預后,檢測其Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的生成水平及表達結締組織生長因子(connective tissue growth factor CTGF)的變化,以期了解胸腺素β4在病理性瘢痕發(fā)病中的作用機制。
方法:
標本來自本院整形科的患者(傷后半年內),采用組織塊
2、消化法培養(yǎng)細胞。成纖維細胞培養(yǎng)至3-6代細胞后進行實驗,共分成5組,其中空白對照組,加入無血清的培養(yǎng)基;實驗組:加入不同濃度的胸腺素β4(0.05、0.1、1、5μg/mL)無血清培養(yǎng)基作用培養(yǎng)6小時。(1)采用ELISA法檢測細胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的含量;(2)通過反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法觀察結締組織生長因子(CTGF) mRNA的表達;(3)采用蛋白印跡法(Western blot)觀測CTGF蛋白的表達。
3、r> 結果:
(1)各實驗濃度的胸腺素β4作用6小時后Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白分泌的值為:5μg/ml組(0.111±0.004、0.112±0.010),1μg/ml組(0.113±0.005、0.140±0.030),0.1μg/ml組(0.114±0.006、0.178±0.010),0.05μg/ml組(0.117±0.004、0.190±0.016),空白組(0.154±0.105,0.222±0.003),各實驗組與對
4、照組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果顯示,各實驗濃度胸腺素β4作用后增生性瘢痕成纖維細胞Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的分泌量減少。
(2)各實驗濃度的胸腺素β4作用6小時后(CTGF) mRNA表達灰度比值為:5μg/ml組(0.556±0.050),1μg/ml組(0.638±0.038),0.1μg/ml組(0.730±0.026),0.05μg/ml組(0.873±0.035),空白組(1.132±0.074),各實驗組與對
5、照組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果顯示,各實驗濃度(0.05、0.1、1、5μg/mL)胸腺素β4作用后增生性瘢痕成纖維細胞CTGFmRNA表達降低。
(3)各實驗濃度的胸腺素β4作用6小時后(CTGF)蛋白表達灰度比值為:5μg/ml組(0.510±0.044),1μg/ml組(0.532±0.026),0.1μg/ml組(0.658±0.032),0.05μg/ml組(0.743±0.035),空白組(0.953±
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