曲尼司特對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生物活性因子和Ⅰ、Ⅲ型前膠原基因表達(dá)的影響.pdf

1、瘢痕疙瘩是創(chuàng)傷愈合過程中形成的一種病理性瘢痕。其主要特征是成纖維細(xì)胞的異常增殖，以及以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)在真皮內(nèi)過度沉積。瘢痕疙瘩在亞洲人群中較為常見，但迄今為止發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前多采用聯(lián)合治療的方法，但仍不能解決瘢痕疙瘩的復(fù)發(fā)難題。本文集中研究在體外培養(yǎng)條件下，一些主要生物活性因子以及I、III型前膠原基因在瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中的表達(dá)情況，比較其與正常皮膚成纖維細(xì)胞間的差別。同時(shí)，進(jìn)一步研究在不同濃度曲尼司特作用下成纖維細(xì)胞增殖

2、、生物活性因子合成和I、III型前膠原基因表達(dá)的變化，探討曲尼司特抗瘢痕疙瘩增生的可能機(jī)制。 首先，建立了來自瘢痕疙瘩患者和正常對(duì)照的成纖維細(xì)胞株，并比較了兩種成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。在無血清培養(yǎng)條件下，兩者的一代生長(zhǎng)期均呈指數(shù)增長(zhǎng)。瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的數(shù)量倍增時(shí)間為42小時(shí)，正常皮膚成纖維細(xì)胞的數(shù)量倍增時(shí)間為57．6小時(shí)，兩者有明顯差異。 其次，采用無血清培養(yǎng)的方法，探討正常皮膚和瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞自分泌表達(dá)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子

3、．βl(TGF-p1)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)和白細(xì)胞介素．6(IL-6)的能力，以及不同濃度曲尼司特對(duì)這些表達(dá)的影響。用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定各個(gè)時(shí)段各孔上清液中上述因子的含量。結(jié)果提示：(1)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞較正常皮膚分泌更多的TGF-pl，曲尼司特可以明顯抑制它的表達(dá)。與對(duì)照組相比，25gg／ml曲尼司特作用24、96小時(shí)，50gg／mi和250gg／ml曲尼司特作用24、72、96小時(shí)后，瘢痕疙瘩成纖維

4、細(xì)胞在TGF-β1的表達(dá)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。(2)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞分泌的bFGF較正常略微升高，曲尼司特可以促進(jìn)其表達(dá)，在24、72小時(shí)尤其明顯。與對(duì)照組相比，50gg／ml曲尼司特作用24、72小時(shí)，250[tg／ml曲尼司特作用24、72、96小時(shí)后，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞在bFGF的表達(dá)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。(3)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞在72、96小時(shí)較正常皮膚分泌更高的IL-6，曲尼司特可降低這種表達(dá)。與

5、對(duì)照組相比，10μg／ml、25~tg／ml和50μg／ml曲尼司特作用96小時(shí)，2501xg／ml曲尼司特作用72、96小時(shí)后，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞在IL-6的表達(dá)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。曲尼司特對(duì)正常皮膚成纖維細(xì)胞的影響大致相似。多因素方差分析顯示，濃度和時(shí)間、濃度和細(xì)胞來源、時(shí)間和細(xì)胞來源之間對(duì)上述生物活性因子的表達(dá)可產(chǎn)生不同的交互作用。 最后，進(jìn)一步探討曲尼司特對(duì)正常皮膚和瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖及I、III型前

6、膠原mRNA表達(dá)的影響。曲尼司特對(duì)正常皮膚和瘢痕疙瘩Fb的形態(tài)學(xué)影響相似。較高濃度曲尼司特作用下，可觀察到Fb胞質(zhì)中有顯著的空泡形成，隨著藥物濃度增加或作用時(shí)間延長(zhǎng)，空泡逐漸增多，且出現(xiàn)空泡的Fb也逐漸增多。這些細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，最終皺縮、脫落或走向凋亡。在低濃度曲尼司特作用下，空泡化現(xiàn)象并不明顯，但隨作用時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞略有皺縮。MTT法檢測(cè)顯示，加入不同濃度曲尼司特后，正常皮膚和瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的OD值較對(duì)照明顯降低，差異

7、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。隨著曲尼司特的濃度增加，其OD值逐漸呈下降趨勢(shì)，提示成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)受抑。 繼而，采用RT—PCR方法分析瘢痕疙瘩和正常皮膚成纖維細(xì)胞在I、III型前膠原mRNA表達(dá)上的差別，瘢痕疙瘩組I、III型前膠原mRNA表達(dá)均較正常皮膚組有明顯增加，其中I型約是正常皮膚組的1．28倍，III型約是正常皮膚組的1．54倍。曲尼司特能抑制正常皮膚和瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞I、III型前膠原mRNA表達(dá)，且隨著濃度增加這

8、種作用越加明顯。與對(duì)照組相比，250gg／mi和500gg／ml曲尼司特干預(yù)后，瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞在I、III型前膠原mRNA的表達(dá)上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，提示其具有抑制膠原合成的能力。 綜上所述，無論在細(xì)胞增殖速度、生物活性因子自分泌，還是I、III型前膠原基因表達(dá)方面，瘢痕疙瘩的成纖維細(xì)胞較正常均有較明顯的不同。一定濃度的曲尼司特可減少瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞TGF-βl和IL-6的表達(dá)，增加bFGF的表達(dá)，從而發(fā)揮抗