積雪草苷對瘢痕成纖維細胞增殖以及膠原與TGF-β1mRNA表達的影響.pdf

1、目的：
　　 瘢痕，是創(chuàng)傷后機體修復的必然結果，它不僅影響美觀而且還會導致組織和器官不同程度的功能障礙。但是創(chuàng)傷修復是一個十分復雜的生物學過程，包含各種修復細胞和細胞因子等眾多因素共同參與的細胞化學、分子生物學、免疫學過程。因此，如何減少瘢痕的形成，防治病理性瘢痕的增生與發(fā)展，一直也是皮膚科的棘手問題。一般認為瘢痕的形成機制主要是由修復細胞、細胞外基質、細胞因子及這三者之間的相互作用關系所組成，防治瘢痕的作用機理的研究也是圍繞著

2、這三方面進行開展的。本研究通過細胞體外實驗的方法探討中藥積雪草苷對培養(yǎng)的原代瘢痕組織成纖維細胞形態(tài)影響，以及對細胞增殖活性與自分泌Ⅰ、Ⅲ膠原和TGF-β1mRNA的抑制作用，旨在為積雪草苷在皮膚科臨床應用上提供一些理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1原代細胞培養(yǎng)無菌條件下，將手術切除的瘢痕組織放入含有青、鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中漂洗，采用組織塊法培養(yǎng)原代成纖維細胞，經(jīng)過免疫細胞化學鑒定成功后，取3-10代細胞用于實驗研究。

3、
　　 2細胞形態(tài)觀察將對數(shù)生長期的瘢痕成纖維細胞以20％胎牛血清DMEM培養(yǎng)液調整成2×104/mL，接種于96孔培養(yǎng)板，200μL/孔，24小時后細胞貼壁，設置空白對照組，分別加入不同濃度藥物在5％CO2、37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24小時后在倒置顯微鏡下觀察積雪草苷對瘢痕成纖維細胞(FB)形態(tài)變化的影響。
　　 3.MTT測定細胞增殖觀察細胞形態(tài)后，每孔加入5mg/mL MTT20μL，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)4小時，棄去液

4、體，加入DMSO150μL/孔，震蕩10min，用酶標儀檢測在492nm處的吸光度值(OD值)，檢測不同濃度積雪草苷對瘢痕FB增殖的抑制作用。
　　 4.RT-PCR測細胞mRNA將細胞接種于6孔板中，待細胞貼壁生長融合后，實驗組加入低、高濃度的藥液，培養(yǎng)24h后，取5×106個瘢痕疙瘩成纖維細胞，提取RNA按照反轉錄試劑盒說明進行cDNA的合成，合成后cDNA進行PCR擴增，檢測積雪草苷對瘢痕FB自分泌Ⅰ、Ⅲ型膠原和TGF-β

5、1mRNA的影響。
　　 5.采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(-x±s)表示，組間計數(shù)資料用t檢驗。
　　 結果：
　　 與對照組相比，積雪草苷藥物濃度在0.1-1.0 mg/mL范圍內，實驗組中瘢痕成纖維細胞體積縮小、變短，樹突狀突起回縮，細胞間隙變大，并且這種作用隨著藥物濃度的增加越明顯；積雪草苷濃度在0.1-1.0 mg/mL范圍內，瘢痕成纖維細胞增殖能力受到明顯抑制，且增殖的抑制效應