缺失型α-地中海貧血基因診斷芯片及在分子流行病學(xué)研究中的應(yīng)用.pdf

1、α-地中海貧血是世界上最常見(jiàn)的單基因遺傳病，也是我國(guó)南方各省最常見(jiàn)、危害最大的遺傳病。本病是由于第16號(hào)染色體短臂末端α-珠蛋白基因缺陷所致，有缺失型和非缺失型兩種，缺失型是主要類(lèi)型。在廣東人中，超過(guò)96％的α-地中海貧血是由東南亞缺失(--SEA)、左側(cè)缺失(-α4.2)和右側(cè)缺失(-α3.7)引起。本病尚無(wú)有效治療方法，攜帶者篩查及產(chǎn)前基因診斷是唯一防止新的患兒出生、提高人口素質(zhì)的有效措施。實(shí)施該措施的前提是對(duì)人群中α-地中海貧血的

2、流行病學(xué)的了解和相應(yīng)的診斷技術(shù)的建立。
　　目前，多種分子診斷技術(shù)已用于α-地中海貧血的診斷檢測(cè)。其中多重Gap-PCR已廣泛用于α-地中海貧血的分子篩查和臨床診斷，但其在檢測(cè)陳舊DNA時(shí)尚有一定局限性?；蛐酒夹g(shù)已用于多種遺傳性疾病的診斷和研究。該技術(shù)可為α-地中海貧血的分子診斷提供進(jìn)一步發(fā)展完善的可能。因此，本課題將研制一種可用于臨床的、具有穩(wěn)定性好、重復(fù)性高的快速檢測(cè)中國(guó)人中常見(jiàn)的三種缺失型α-地中海貧血的基因芯片。

3、>　　在參照國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，我們首先設(shè)計(jì)了特異性的PCR引物，建立并優(yōu)化了PCR反應(yīng)體系和條件。我們也設(shè)計(jì)了一系列長(zhǎng)短不同的特異性的探針。在對(duì)醛基片的質(zhì)量、探針的合成、點(diǎn)樣液成分、探針濃度、雜交和洗滌等條件進(jìn)行了研究比較后，我們獲得了最適合的制備工藝和條件，并制備了含有70個(gè)寡核苷酸的探針的芯片。通過(guò)對(duì)臨床標(biāo)本的檢測(cè)，設(shè)定了檢測(cè)信號(hào)的判定標(biāo)準(zhǔn)：僅信噪比大于10，并且信號(hào)強(qiáng)度大于1000的探針才被認(rèn)為是陽(yáng)性的；如果-α3.7探針檢測(cè)為

4、陽(yáng)性，那么α2的信號(hào)值必須大于-α3.7的一半時(shí)才能被判定為陽(yáng)性。
　　在上世紀(jì)八十年代使用血液學(xué)方法對(duì)全國(guó)范圍的地中海貧血的流行病學(xué)研究結(jié)果對(duì)地中海貧血的預(yù)防起了巨大的作用。但是伴隨我國(guó)經(jīng)濟(jì)高速發(fā)展的大規(guī)模的人口移動(dòng)以及幾十年來(lái)對(duì)地中海貧血的有效防治，我國(guó)人群中地中海貧血的流行病學(xué)可能發(fā)生變化。同時(shí)，血液學(xué)研究的結(jié)果與實(shí)際情況可能有偏差，需要從基因水平進(jìn)一步驗(yàn)證和核實(shí)。因此，新一輪的基于分子分析的全國(guó)范圍的地中海貧血流行病學(xué)的調(diào)

5、查研究勢(shì)在必行。這將是一個(gè)浩大的工程。一個(gè)小規(guī)模具有代表性的人群中地中海貧血流行病學(xué)的調(diào)查研究，將具有積極意義。深圳作為一座移民城市，其人口來(lái)源于全國(guó)各地，深圳市人群中地中海貧血的流行病學(xué)對(duì)于全中國(guó)人群有一定的代表性。因此，我們也進(jìn)行了深圳市人群中地中海貧血流行病學(xué)的研究。
　　使用自制的芯片我們對(duì)廣東省深圳市人群地中海貧血的分子流行病學(xué)進(jìn)行了調(diào)查。在檢測(cè)過(guò)程中，我們檢測(cè)到了一例特殊的病例，病人--SEA、?α3.7和α2均為陽(yáng)性

6、。血液血表型表現(xiàn)為典型的α-地中海貧血特點(diǎn)。通過(guò)分子分析鑒定其為HKαα和--SEA的復(fù)合雜合子。病人母親基因型也為HKαα/--SEA，其父親基因型為αα/--SEA。據(jù)我們所知，這是首次報(bào)道HKαα和--SEA的復(fù)合雜合子。由于HKαα/--SEA有典型的α-地中海貧血特點(diǎn)，與αα/--SEA的臨床表型一致，因此在HKαα和αα之間并無(wú)明顯的血液學(xué)和臨床差異。這也反映了HKαα與αα基因序列的一致性。
　　通過(guò)對(duì)到深圳幾家大的

7、醫(yī)院就診和尋求產(chǎn)前咨詢(xún)的3713個(gè)人進(jìn)行了表型篩查和基因分析，我們獲得了深圳市人群中地中海貧血的流行病學(xué)和突變譜帶。深圳人口地中海貧血基因攜帶率為6.49%，其中α-地中海貧血為4.34%，β-地中海貧血為1.99%；α-地中海貧血和β-地中海貧血雙重雜合子0.16%。較廣東省其他地區(qū)的低。這可能與深圳市人口多為外來(lái)移民有關(guān)。我們共檢測(cè)到3種缺失型α-地中海貧血突變、1種非缺失型α-地中海貧血點(diǎn)突變和9種β-地中海貧血。與廣東省其他地區(qū)