用QM-FISH方法檢測t(821)AML的異質(zhì)性及亞克隆間的進化關(guān)系.pdf

1、目的：用QM-FISH的方法檢測t(8;21) AML中是否存在異質(zhì)性亞克隆，以及不同亞克隆之間在遺傳學上的承繼關(guān)系。
　　方法：在數(shù)據(jù)庫中定位檢索含目的基因AML1、ETO、WT1、c-kit和p27的BAC克隆，用缺口平移的方法將熒光素染料標記的dUTP或dCTP連接到目的基因上制成五色FISH探針。白血病細胞經(jīng)低滲處理、固定后濕法滴片。將制備好的FISH探針雜交到患者標本上，經(jīng)熒光顯微鏡采集熒光信號，獲得清晰穩(wěn)定的多色圖像。

2、計數(shù)AML1-ETO陽性細胞中AML1-ETO融合基因，以及基因AML1、ETO、WT1、c-kit和p27的拷貝數(shù)。將各個基因拷貝數(shù)相同的細胞定義為同一亞克隆，統(tǒng)計同一患者標本中亞克隆的種類及比例，進而推測不同亞克隆之間的進化關(guān)系;比較配對的初診及復發(fā)病例中優(yōu)勢亞克隆的演變，推測與白血病復發(fā)、耐藥相關(guān)的基因異常。
　　結(jié)果：共檢測36例初診的t(8;21) AML骨髓標本，1例與初診病例配對的復發(fā)標本。在36例初診病例當中:11

3、.1％(4/36)的患者具有AML1-ETO融合信號增加，8.33％(3/36)的患者有AML1信號增加，27.78％(10/36)的患者有AML1信號缺失，并且這種信號缺失具有性別差異，主要出現(xiàn)在男性患者當中，11.11％(4/36)有ETO信號增加，55.56％(20/36)的患者有WT1信號增加，41.67％(15/36)的患者有p27信號增加，38.89％(14/36)的患者有c-kit信號的增加;77.78％(28/36)可檢