新型番荔枝酰胺衍生物FLZ對去血清培養(yǎng)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：FL2是番荔枝葉提取物番荔枝酰胺的合成衍生物,前期研究表明,該化合物在腦缺血模型上具有神經(jīng)保護(hù)作用。但FLZ對星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用研究尚少。近年研究表明,星形膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中具有重要的生理和病理意義。去血清培養(yǎng)是體外用于模擬腦缺血的常用模型之一。S100B是一種主要表達(dá)在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的Ca2+結(jié)合蛋白,在急性中風(fēng)、心臟停搏、蛛網(wǎng)膜下腔出血中也表現(xiàn)出敏感、特異性強(qiáng)的生物標(biāo)記物特點(diǎn)。在去血清培養(yǎng)損傷引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)

2、激過程中,S100B參與其中。胞外S100B作用于細(xì)胞膜受體可引起活性氧簇(reactiveoxidative species,ROS)生成,并由此對細(xì)胞造成氧化應(yīng)激損傷。因此本論文旨在研究FLZ對去血清培養(yǎng)引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞S100B過量分泌的作用,以及FLZ在由此引發(fā)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用。
　　 方法：在去血清培養(yǎng)的原代大鼠腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞模型上,以MTT法檢測細(xì)胞存活率,Hoechst33342染色后觀察細(xì)胞核

3、形態(tài)變化,ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中S100B蛋白含量,DCFDA法檢測細(xì)胞內(nèi)ROS生成。生化法檢測超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力,及丙二醛(MDA)與谷胱甘肽(GSH)含量。
　　 結(jié)果：去血清培養(yǎng)致星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率顯著下降(P<0.001),FLZ(1×10-7mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L、3×10-6 mol/L)可提高去血清培養(yǎng)條件下星形膠質(zhì)細(xì)胞的

4、存活率。去血清培養(yǎng)致原代培養(yǎng)的大鼠腦皮層星形膠質(zhì)受損細(xì)胞核明顯增多(P<0.001),FLZ各濃度均可減輕去血清培養(yǎng)造成的大鼠腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞核受損狀況(P<0.001)。去血清培養(yǎng)4 h內(nèi),模型組星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液中S100B含量持續(xù)升高,4 h后與正常對照組相比明顯增多(P<0.001)。FLZ(1×10-7 mol/L,1×10-6mol/L)組星形膠質(zhì)細(xì)胞S100B分泌量緩慢升高,4 h后分泌量顯著低于模型組(P＜0.001)

5、。模型組細(xì)胞內(nèi)ROS含量較正常對照組升高4.11倍,FLZ(1×10-7 mol/L～3×10-6 mol/L)可顯著的減少去血清培養(yǎng)造成的星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ROS的過度生成。去血清培養(yǎng)致原代星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)SOD活力明顯下降(P<0.001),脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA明顯增多(P<0.001),GSH含量明顯降低(P<0.001),GSH-Px的活性升高(P<0.01)。FLZ(3×10-7 mol/L～3×10-6 mol/L)可增加SOD活

6、力,改善率分別為21％,41％,73％;減少M(fèi)DA過量生成,改善率分別為39％,45％,63％；升高GSH含量,升高率分別為25％,33％,63％。FLZ在1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L濃度下可逆轉(zhuǎn)去血清損傷造成的GSH-Px活性變化,而1×10-6 mol/L和3×10-6 mol/L組對GSH-Px活性無明顯影響。
　　 結(jié)論：去血清培養(yǎng)致原代大鼠腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷,FLZ對去血清培養(yǎng)損傷星形膠質(zhì)細(xì)胞