鹽酸法舒地爾對(duì)體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪損傷的保護(hù)作用和機(jī)制探討.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩53頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:建立星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)方法以及氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,研究鹽酸法舒地爾(fasudil hydrochloride,F(xiàn)H)(5μM、10 μM)對(duì)體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。
   方法:采用新生1~3天SD 大鼠進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)。待原代細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶底85%~90%時(shí),即可進(jìn)行細(xì)胞傳代。取傳一代后生長(zhǎng)至第五天的星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)

2、驗(yàn)。應(yīng)用氧清除劑連二亞硫酸鈉(Na2S2O4),聯(lián)合孵育液缺糖的方法建立星形膠質(zhì)細(xì)胞的OGD 損傷模型,通過(guò)噻唑藍(lán)(thiazoyl blue tetrazolium bromide,MTT)染色法和檢測(cè)乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)的釋放量來(lái)評(píng)價(jià)星形膠質(zhì)細(xì)胞受損傷程度,并觀察FH(5μM,10 μM)預(yù)孵育對(duì)OGD 損傷的保護(hù)作用。采用高效液相色譜(high performance liquidchro

3、matography,HPLC)熒光檢測(cè)法測(cè)定培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞外液中谷氨酸(glumaticacid,Glu)、甘氨酸(glycine,Gly)、?;撬幔╰aurine,Tau)及γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)的含量;利用2',7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(2',7'-Dichlorofluoresceindiacetate,DCFH-DA)熒光探針來(lái)檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞中活性氧簇(reactive oxygen

4、species,ROS)含量的變化來(lái)探討FH 對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制。
   結(jié)果:1.MTT分析:以正常對(duì)照組細(xì)胞活力為100%,OGD 造模組星形膠質(zhì)細(xì)胞的百分活力下降到正常對(duì)照組的24%,兩組間差異有極顯著性意義(p<0.01);FH 低劑量組與高劑量組星形膠質(zhì)細(xì)胞百分活力分別為正常對(duì)照組的41.2%和41.5%,較OGD 造模組均上升,且差異均有極顯著性意義(p<0.01);但FH 低劑量組和高劑量組間比較無(wú)顯著性

5、差異(p>0.05)。2.LDH 釋放量:正常組星形膠質(zhì)細(xì)胞僅有少量LDH 釋放,OGD 造模組星形膠質(zhì)細(xì)胞的LDH 釋放量顯著增加,約為正常對(duì)照組的2.1倍,與正常對(duì)照組相比差異有極顯著性意義(p<0.01);FH 低劑量組與高劑量組星形膠質(zhì)細(xì)胞LDH 釋放量與OGD模型組比均下降,且差異均有極顯著性意義(p<0.01);且 FH 降低LDH 釋放量的作用呈劑量依賴(lài)性(p<0.05)。3.星形膠質(zhì)細(xì)胞外液中氨基酸含量測(cè)定:OGD造模組

6、四種氨基酸含量較正常組均顯著增高(p<0.01),且興奮性氨基酸Glu 增高的幅度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于Gly,Tau,GABA 這三種抑制性氨基酸;與OGD 造模組相比,F(xiàn)H 低劑量組和高劑量組細(xì)胞培養(yǎng)外液中氨基酸含量均顯著降低(p<0.01),且Glu 降低最為顯著;但FH 低劑量組和高劑量組間比較無(wú)顯著性差異(p>0.05)。4.星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)ROS含量的變化:造模組ROS 生成較正常組明顯增多;FH 不同劑量給藥組同造模組相比,可明顯抑制RO

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論