羥基積雪草苷對小膠質細胞氧糖剝奪復供損傷的保護機制.pdf

1、腦缺血是威脅人類健康與生存的主要疾病之一，致死致殘率極高。缺血腦組織在恢復血液灌注后損傷進一步加重的臨床病理過程即為缺血再灌注損傷（I/R）。缺血再灌注損傷中存在一系列的腦組織損傷和細胞致死過程，其發(fā)病機理尚未完全闡明，目前無特效治療藥物。多種因素所導致的小膠質細胞激活可引發(fā)腦內的炎癥反應，在腦缺血發(fā)生發(fā)展中扮演重要的角色，活化的小膠質細胞可參與神經元的退變過程，因此以小膠質細胞為靶標，研究抑制其激活和炎性因子產生的藥物已成為腦缺血治療

2、藥物開發(fā)領域的熱點之一。
　　中藥提取物羥基積雪草苷（MA）具有抗炎、抗氧化、促進傷口愈合等廣泛的藥理學活性，體內實驗已證實MA可以減小腦缺血/再灌損傷大鼠的皮層梗死面積，減輕神經功能損傷，并且發(fā)現(xiàn)這種保護作用可能與其抑制中樞炎癥反應密切相關，但具體作用機制仍需進一步深入探討。本研究擬在前期基礎上，結合體外氧糖剝奪復供（OGD/R）模型，進一步觀察MA對小膠質細胞的激活、TLR4/MyD88信號通路及其下游分子 NF-κB介導的炎

3、癥損傷的作用，從“信號通路－小膠質細胞－神經炎癥”展開研究，以期闡明羥基積雪草苷抗腦缺血炎癥損傷機制，為新藥開發(fā)及臨床應用提供科學依據。
　　目的：研究羥基積雪草苷（MA）對BV2小膠質細胞OGD/R損傷的保護作用，研究羥基積雪草苷對OGD/R及LPS誘導炎癥損傷的抑制作用，探討羥基積雪草苷是否通過調節(jié)TLR4/MyD88/NF-κB信號通路，降低炎癥反應，從而發(fā)揮神經保護作用。
　　方法：建立小膠質細胞BV2小膠質細胞氧糖

4、剝奪/復供（OGD/R）的體外模型。實驗分組分為OGD/R+MA（50μM）、OGD/R+MA（100μM）、OGD/R+MA（200μM）、OGD/R組及空白對照組。建立LPS誘導的BV2小膠質細胞炎癥損傷模型，實驗分組分為LPS+MA（200μM）、LPS組及空白對照組。MTT法和光鏡檢測觀察小膠質細胞活力和激活狀態(tài)；RT-qPCR檢測細胞IL-1β、IL-6、TNFα、TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA表達情況；ELISA

5、檢測細胞培養(yǎng)上清IL-1β、IL-6和TNFα蛋白的表達情況；免疫熒光技術檢測TLR4、MyD88和NF-κB蛋白的表達及定位情況；Western Blot定量檢測TLR4、MyD88和NF-κB蛋白的表達水平變化。
　　結論：羥基積雪草苷（MA）對 BV2小膠質細胞氧糖剝奪復供損傷有較好的神經保護作用，其機制可能通過下調TLR4/MyD88信號通路的表達，抑制下游核轉錄因子NF-κB的表達，進一步降低受NF-κB調控的炎性因子表