大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞Prdx6-iPLA2在氧糖剝奪-復(fù)氧復(fù)糖時(shí)對(duì)神經(jīng)元的炎癥損傷作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：炎癥損傷是加重腦缺血性再灌注損害的主要因素之一。而小膠質(zhì)細(xì)胞作為腦內(nèi)常駐的免疫細(xì)胞在缺血性腦卒中引發(fā)的炎癥反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。內(nèi)源性抗氧化蛋白酶Peroxiredoxin-6(Prdx6)在細(xì)胞和動(dòng)物模型中都被證明具有保護(hù)作用。然而，Prdx6的磷脂酶A2（PLA2）活性還沒(méi)有得到深入的研究，尤其它在腦缺血再灌注損傷中的相關(guān)作用及機(jī)制還未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的：探討小膠質(zhì)細(xì)胞 Prdx6-iPLA2對(duì)氧糖剝奪再?gòu)?fù)氧復(fù)糖（O

2、xygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）誘導(dǎo)的神經(jīng)元炎癥損傷及作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）構(gòu)建四條Prdx6 SiRNA（Y2089，Y2090，Y2091和Y2092）慢病毒干擾片段，感染已分離純化過(guò)的小膠質(zhì)細(xì)胞，在倒置熒光顯微鏡下觀察小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和感染效率，用RT- qPCR和Western Blot方法檢測(cè)病毒的干擾效率，并篩選出最佳的一條干擾片段。
　

3、?。?）構(gòu)建一條沒(méi)有磷脂酶A2活性的Prdx6-iPLA2 SiRNA慢病毒干擾片段，與已篩選出的干擾片段同時(shí)感染小膠質(zhì)細(xì)胞，以達(dá)到抑制Prdx6-iPLA2活性的目的，并建立小膠質(zhì)細(xì)胞-原代神經(jīng)元共培養(yǎng)OGD/R模型。
　?。?）對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行MJ33預(yù)處理，并建立共培養(yǎng)OGD/R模型。
　?。?）運(yùn)用 MTS和 LDH測(cè)定共培養(yǎng)系統(tǒng)中神經(jīng)元活性和損傷程度。
　　（5）用Elisa檢測(cè)共培養(yǎng)液體中炎癥因子白介素1β

4、（IL-1β），白介素17（IL-17）和白介素23（IL-23）的含量。
　?。?）Western blot檢測(cè)Toll like receptor2/4(TLR2/4)，NF-κ Bp65, inducibe Nitric Oxide Synthase(iNOS)和cyclooxygenase(COX-2)的蛋白水平。
　　結(jié)果：
　?。?）慢病毒載體感染小膠質(zhì)細(xì)胞后，其中 Y2091片段的感染效率最佳。
　

5、　（2）MTS和LDH結(jié)果顯示，干擾小膠質(zhì)細(xì)胞中Prdx6-iPLA2和加入MJ33后，神經(jīng)元的存活率增加，LDH釋放減少。
　?。?）Elisa檢測(cè)結(jié)果顯示，干擾小膠質(zhì)細(xì)胞 Prdx6-iPLA2和加入MJ33后，培養(yǎng)基中炎癥因子釋放減少。
　?。?）Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，干擾小膠質(zhì)細(xì)胞Prdx6-iPLA2或者加入 MJ33均可降低小膠質(zhì)細(xì)胞中炎癥蛋白 TLR2/4， NF-κBp65,iNOS和COX-