快速檢測結(jié)核早期分泌性靶抗原6診斷結(jié)核感染的研究.pdf

1、目的：
　　結(jié)核分枝桿菌（MTB）感染所致的結(jié)核?。═B）是世界上發(fā)病率、死亡率最高的傳染病之一，其診治仍然面臨諸多困境。結(jié)核性腦膜炎(TBM)是最嚴(yán)重的肺外TB，而且其所占比例呈現(xiàn)增加趨勢。早期、準(zhǔn)確的檢測一直是TBM診治難以逾越的障礙，也是控制疾病和降低死亡率的關(guān)鍵。缺乏靈敏度（Se）和特異度（Sp）均高的檢測方法和診斷金標(biāo)準(zhǔn)是早期診斷的最大困難。研究的目的是用免疫熒光染色（IF染色）、免疫細(xì)胞化學(xué)DAB染色（IC-DAB染色

2、）和免疫細(xì)胞化學(xué)堿性磷酸酶染色（IC-AKP染色）檢測腦脊液（CSF）細(xì)胞內(nèi)的早期分泌性靶抗原6（ESAT-6）來診斷結(jié)核性腦膜炎（TBM），比較三種染色方法診斷的Se和Sp，尋找最有效的染色及診斷方法，為進(jìn)一步研究提供指導(dǎo)和基礎(chǔ)支持。
　　方法：
　　1.以公認(rèn)的南非專家共識作為 TBM確診的標(biāo)準(zhǔn)。由臨床癥狀結(jié)合病原學(xué)培養(yǎng)或改良抗酸染色（AFB染色）陽性確診為TBM的患者組成病例組。對照組為非TBM患者，培養(yǎng)、改良AFB染

3、色等結(jié)核相關(guān)檢查陰性，確診為隱球菌性腦膜炎、病毒性腦膜炎等。收集CSF標(biāo)本病例組144份；對照組180份。對每份CSF細(xì)胞內(nèi)的ESAT-6分別進(jìn)行IF染色、IC-DAB染色和IC-AKP染色并閱片。記錄每種染色每份標(biāo)本的陽性細(xì)胞百分比。應(yīng)用PASW statistics18.0統(tǒng)計(jì)軟件，分別繪制三種染色的ROC曲線。按照截?cái)帱c(diǎn)原則得出每種染色診斷的Se、Sp、YI指數(shù)等。比較三種染色方法診斷TBM的Se、Sp等得出最有效的染色和診斷方法

4、。
　　2.病例組的144份CSF標(biāo)本，應(yīng)用 IF染色和IC-DAB染色對 CSF細(xì)胞內(nèi)的ESAT-6進(jìn)行染色。依據(jù)胞核及胞體形態(tài)判斷細(xì)胞類型。記錄兩種染色方法200個細(xì)胞中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的陽性細(xì)胞數(shù)。把兩種染色方法得出的三種細(xì)胞類型的陽性細(xì)胞數(shù)分別進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，比較兩種染色方法三種不同細(xì)胞類型陽性細(xì)胞數(shù)的差異。
　　3.篩選病例組中初次診治，并且之前沒有應(yīng)用過抗結(jié)核及抗生素治療的 TBM患者的CSF標(biāo)本70

5、份作為研究對象。IF染色后，據(jù)胞核及胞體形態(tài)辨別淋巴細(xì)胞。以 CSF陽性淋巴細(xì)胞比例>50％和<50%分組。治療8周后應(yīng)用改良 Rankin評分（MRC）進(jìn)行療效評定。把 MRC評分0-1的定為痊愈組，2-3的定為有效組，4-5的定為后遺癥組。應(yīng)用行×列表資料的χ2檢驗(yàn)比較 CSF陽性淋巴細(xì)胞比例>50%和<50%兩組治療效果痊愈、有效、后遺癥的構(gòu)成比。用兩樣本等級資料的秩轉(zhuǎn)換非參數(shù)檢驗(yàn)，比較不同組間的療效。
　　結(jié)果：
　

6、　1.三種染色方法ESAT-6表達(dá)陽性CSF細(xì)胞的胞漿中，IF染色可見綠色熒光，IC-DAB染色可見棕黃色或黃褐色顆粒，IC-AKP染色可見紫藍(lán)色顆粒。三種染色方法分別繪制ROC曲線，計(jì)算曲線下面積分別為0.94、0.863和0.894。免疫熒光曲線下面積最大，診斷準(zhǔn)確度最高，IC-DAB染色和IC-AKP染色準(zhǔn)確度中等偏高。三種染色方法的截?cái)帱c(diǎn)分別為10.0%、14.5%和10.5%。三種染色方法的Se分別為88.89%、83.3%和

7、78.5%；Sp分別為93.33%、82.8%和91.1%。IF染色的Se和Sp均最高，IC-DAB染色的Se較IC-AKP染色高，IC-AKP染色的Sp較IC-DAB染色高。三種染色方法的陽性預(yù)測值（PV+）分別為91.43%、80.00%和78.47%；陰性預(yù)測值（PV-）分別為91.30%、86.21%和84.10%。IF染色的PV+最高說明假陽性率最低。IF染色的PV-最高說明假陰性率均低。陽性似然比（LR+）分別為13.33、

8、4.84和8.82；陰性似然比（LR-）分別為0.12、0.20和0.24。Youden指數(shù)（YI指數(shù)）分別為82.22%、66.1%和69.6%。IF染色LR+高、YI指數(shù)高和LR-低表明應(yīng)用IF染色的真實(shí)性最好。
　　2. IF染色和IC-DAB染色檢測中性粒細(xì)胞內(nèi)ESAT-6差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明兩種染色方法檢測中性粒細(xì)胞的結(jié)果不同；兩種染色方法對單核和淋巴細(xì)胞的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.對CSF陽性淋巴細(xì)胞比例>

9、50%和<50%兩組治療效果痊愈、有效、后遺癥的構(gòu)成比比較，得出兩組患者三種療效的構(gòu)成比不同。比較不同組間的療效，得出陽性淋巴細(xì)胞比例<50%組后遺癥多于>50%組，陽性淋巴細(xì)胞比例<50%組痊愈的少于>50%組。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用IF染色、IC-DAB染色和IC-AKP染色檢測CSF細(xì)胞內(nèi)ESAT-6來診斷TBM。三種染色方法均能檢測出CSF細(xì)胞中ESAT-6表達(dá)陽性的細(xì)胞。三種方法中IF染色的Se及Sp最高，診

10、斷的準(zhǔn)確度最高。IF染色和IC-DAB染色檢測ESAT-6對中性粒細(xì)胞結(jié)果不同；而檢測單核和淋巴細(xì)胞無統(tǒng)計(jì)差異。IF染色和IC-DAB染色相比IF染色對中性粒細(xì)胞的準(zhǔn)確度高。研究還表明CSF陽性淋巴細(xì)胞比例>50%與<50%患者的療效構(gòu)成比不同。研究也說明當(dāng)陽性淋巴細(xì)胞比例>50%的患者預(yù)后要好于比例<50%的患者。
　　因此IF染色檢測細(xì)胞內(nèi)ESAT-6是一種早期、有效、快速的檢測結(jié)核感染的方法，是準(zhǔn)確有效的診斷TBM的方法，為