OLIGOTM蜜煉益生元A6降低慢性腎臟病患者血清硫酸吲哚酚和硫酸對甲酚水平.pdf

1、背景與目的：
　　慢性腎臟?。–KD）已經(jīng)成為一個主要的全球性公共衛(wèi)生問題。根據(jù)最近的美國健康和營養(yǎng)調(diào)查（NHANES）研究資料，CKD1-4期患者患病率從1988-1994年的10.0％提高到1999-2004年的13.1%。中國最新的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，成年人中CKD患病率占普通人群的10.8%。CKD患者全因死亡和心血管死亡風(fēng)險比普通人群顯著增加。增加的心血管疾?。–VD）不僅只限制于終末期腎病(ESRD)患者，更早期的C

2、KD患者在進(jìn)展到腎衰竭之前更多的是死于CVD。然而，傳統(tǒng)的心血管風(fēng)險因素不能完全解釋CKD患者的心血管（CV）風(fēng)險，因此，我們假設(shè)CKD患者存在特定的機制導(dǎo)致CVD風(fēng)險升高。
　　大量有機廢物溶質(zhì)的潴留可導(dǎo)致尿毒癥，這些被稱作尿毒癥潴留溶質(zhì)或者尿毒素的廢物溶質(zhì)在正常情況下可經(jīng)腎臟排泄。最近研究表明，出現(xiàn)在尿毒癥中的兩種蛋白結(jié)合的尿毒癥毒素硫酸吲哚酚（簡稱IS）和硫酸對甲酚（簡稱PCS）可能是CKD人群高發(fā)CVD的風(fēng)險因素。IS和P

3、CS來源于大腸對飲食氨基酸的細(xì)菌酵解過程。對甲酚（簡稱PC）是分子量為180-Da的蛋白結(jié)合類溶質(zhì)，起源于結(jié)腸酪氨酸和苯丙氨酸的酵解產(chǎn)物，腸道細(xì)菌代謝產(chǎn)生的PC絕大部分在腸壁結(jié)合成PCS并在肝臟合成對甲酚葡萄糖酸苷。類似于酚類毒素，色氨酸在腸道細(xì)菌色氨酸酶催化下轉(zhuǎn)化為吲哚類毒素，吲哚類毒素在腸道吸收入血并在肝臟代謝轉(zhuǎn)化為IS。
　　研究發(fā)現(xiàn)CKD/ERSD患者腸道微生物菌群數(shù)量和種類發(fā)生改變。研究表明，尿毒癥患者十二指腸和空腸的需

4、氧菌和厭氧菌數(shù)量均增加，而健康對照組定植菌數(shù)量未增加。CKD患者結(jié)腸微生物菌群組成發(fā)生改變，顯示乳酸桿菌數(shù)量明顯減少。Hida M等人分析健康者和血液透析患者大便細(xì)菌以觀察結(jié)腸微生物菌群組成改變，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，透析患者結(jié)腸需氧菌過度生長而厭氧菌數(shù)量減少。Vaziri等人的研究亦表明ESRD和正常對照組之間腸道菌落數(shù)量有顯著差異。為避免個體間不同腎功能水平對腸道菌群的影響，研究者還檢測了5/6腎切除大鼠的腸道菌群數(shù)量，結(jié)果顯示腎衰大鼠比對照組

5、大鼠細(xì)菌數(shù)量明顯減少。ESRD體內(nèi)蓄積的毒素直接損害腸道粘膜亦可引起腸道菌群失調(diào)[11]，由于腎功能下降，尿素分泌進(jìn)入腸道增加，在腸道細(xì)菌尿素酶催化下產(chǎn)生大量氨，亦可影響腸道共生菌的生長和繁殖。腸道粘膜屏障是血液和腸道毒性代謝產(chǎn)物之間的界面,其結(jié)構(gòu)和功能影響機體健康與疾病。CKD患者腸道粘膜病理組織學(xué)改變包括絨毛塌陷、隱窩加深和炎癥細(xì)胞浸潤。CKD患者腸道粘膜滲透性增加，上皮緊密結(jié)合功能障礙導(dǎo)致致細(xì)菌移位和內(nèi)毒素穿過腸壁。腎衰大鼠實驗證

6、實腸道多部位上皮緊密結(jié)合關(guān)鍵蛋白組分損耗。此外，血液透析介導(dǎo)的系統(tǒng)性循環(huán)壓力改變和腸道局部反復(fù)缺血也可造成腸道屏障結(jié)構(gòu)和功能損傷。
　　由于 CKD患者腸道菌群組成和屏障功能受損，CKD人群通過多種機制促進(jìn)蛋白質(zhì)的發(fā)酵過程，包括：(1)小腸低效率的蛋白同化作用致更多蛋白質(zhì)進(jìn)入大腸；(2)結(jié)腸轉(zhuǎn)運時間延長；(3)繼發(fā)結(jié)腸尿素擴散增加導(dǎo)致腸腔PH值升高，所有這些機制均導(dǎo)致CKD人群腸道微環(huán)境細(xì)菌功能和組成改變。隨著腎臟清除率下降，CK

7、D患者血漿IS和PCS濃度升高并與eGFR呈負(fù)相關(guān)。
　　因此，通過調(diào)節(jié)腸道微環(huán)境細(xì)菌組成和/或結(jié)腸轉(zhuǎn)運時間以求降低這些蛋白結(jié)合類尿毒素的產(chǎn)生表現(xiàn)出一種具有前景性的治療策略。目前已經(jīng)探索出多種重建腸道菌群平衡的治療方法，但針對CKD/ESRD結(jié)腸微環(huán)境的治療手段主要集中在調(diào)節(jié)腸道微環(huán)境和減少腸道毒性代謝產(chǎn)物吸收兩方面。例如，益生菌是一類對人體健康起到促進(jìn)作用的活體微生物，它能夠改變腸道微生物組成和影響炎癥狀態(tài)；通過外源性細(xì)菌移植和

8、抗生素口服改變腸道細(xì)菌多樣性以重建腸道菌群平衡；AST-120有效減少腸道吲哚類和對甲酚的吸收，透析前CKD患者口服AST-120不僅降低血漿和尿液IS濃度，還延長起始透析的時間，動物研究報道AST-120降低血漿IS水平及TGF-β1濃度。
　　然而，益生元是一種不被腸道消化、吸收的食物組分，它通過選擇性刺激結(jié)腸部分細(xì)菌的生長和活性而對機體產(chǎn)生有利影響，如提高可利用碳水化合物與氮的比例，促進(jìn)短鏈脂肪酸合成，降低結(jié)腸PH值，加快結(jié)

9、腸轉(zhuǎn)運時間以及抑制催化PCI和IS合成的反應(yīng)酶活性。益生元可促進(jìn)腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌屬的生長而抑制大腸桿菌、類桿菌和梭狀芽胞桿菌屬生長。初步證據(jù)表明含低聚果糖菊粉可提高雙歧桿菌素生長、介導(dǎo)體重下降和改善代謝功能。Meijers課題組報道口服含低聚糖菊粉的益生元可降低血液透析患者血漿硫酸吲哚酚和對甲酚濃度。因此，從理論上講，益生元治療腸道菌群失調(diào)從而降低CKD患者血漿蛋白結(jié)合類毒素具有更大的潛在研究價值。
　　本研究通過橫斷面調(diào)查

10、研究分析不同分期透析前CKD患者血清IS和PCS濃度變化及其與臨床生化指標(biāo)的關(guān)系，并設(shè)立前瞻性研究觀察OLIGOTM蜜煉益生元A6對透析前CKD3-5期患者血清IS和PCS濃度的影響，為延緩CKD病情進(jìn)展及降低CVD發(fā)生率提供一種新的治療策略。
　　對象與方法：
　　1.實驗設(shè)計：設(shè)立橫斷面臨床調(diào)查研究及服用OLIGOTM蜜煉益生元A6干預(yù)的前瞻性研究
　　2.研究對象：橫斷面臨床調(diào)查研究共入選104例，分為2部分：(

11、1)CKD1-5期患者95例；(2)健康對照組9例；服用OLIGOTM蜜煉益生元A6干預(yù)的前瞻性研究入選15例。
　　3.登記入選者一般資料：記錄性別、年齡及原發(fā)病，測量收縮壓、舒張壓。
　　4.CKD患者的實驗室生化資料：血紅蛋白（Hb）、血清白蛋白（Alb）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、血尿酸（UA）、胱抑素C（CysC）、甘油三酯（TG）、血膽固醇（CHO）、低密度脂蛋白C（LDL-C）、C反應(yīng)蛋白（CRP）

12、、血鈣（Ca）、血磷（P），計算腎小球濾過率（eGFR）。
　　5．采用液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC/MS/MS)測定人血漿樣品中硫酸吲哚酚和硫酸對甲酚濃度。（委托中山市瑪格斯生物有限公司測定，具體測定方法見第一部分）。
　　6．應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，視數(shù)據(jù)類型，平均水平用均數(shù)（X±s）或中位數(shù)（四分位間距）表示。組間比較采用t檢驗，或單因素方差分析或秩和檢驗。根據(jù)數(shù)據(jù)類型，組間比較亦采用配對資料

13、的t檢驗或配對資料的秩和檢驗。通過關(guān)聯(lián)性分析及線性回歸分析評價變量間的相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.CKD患者血清IS和PCS水平隨著CKD分期增高而逐漸升高，CKD1-3期患者血清IS和PCS水平與健康對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而CKD4-5期者血清IS和PCS水平較健康對照組和CKD1-3期患者顯著性升高。
　　2.隨著CKD分期增高，血壓、Scr、BUN、CysC和血P逐漸升高，而

14、ALB、Hb和血Ca逐漸降低。
　　3．CKD患者LnIS與LnPCS呈正相關(guān)，LnIS、LnPCS與eGFR均呈負(fù)相關(guān)；LnIS與收縮壓、舒張壓、Cr、BUN、UA、CysC、Alb、Hb、CHO、P、CRP呈正相關(guān)，LnPCS與收縮壓、舒張壓、Cr、BUN、CysC、Hb呈正相關(guān)。
　　4．簡單線性回歸分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)與LnIS相關(guān)的自變量為：舒張壓、Scr、BUN、UA、CysC、 eGFR、Alb、Hb、TG和P共10個

15、因素；與LnPCS相關(guān)的自變量為：收縮壓、舒張壓、Scr、BUN、CysC、 eGFR、Hb、TG共8個因素。采用逐步回歸的方法建立一個多重線性回歸方程，回歸模型結(jié)果顯示血清 LnIS只受到 eGFR(標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)為-0.459)的影響（F=24.763,P<0.001），血清LnPCS則受到eGFR(標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)為-0.28)、TG(標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)為-0.211)和收縮壓(標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)為0.219)的影響（F=8.424,P=0

16、.007）。從標(biāo)準(zhǔn)回歸系數(shù)可知，eGFR對血清LnIS和LnPCS影響最大。
　　5．CKD3-5期患者口服OLIGOTM蜜煉益生元A6治療后血清IS、PCS水平隨著時間延長而逐漸下降，其中治療后第2周血清IS濃度較治療前明顯下降，治療第4周后進(jìn)一步下降；血清PCS濃度在治療第4周后較治療前和第2周后顯著下降；而治療后第8周和第4周比較，血清IS、PCS濃度無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　6．CKD3-5期患者口服OLIGOTM蜜煉益生

17、元A6治療后腎功能、血脂、Alb、Hb、CRP、電解質(zhì)等生化指標(biāo)在治療前、第2周、第4周和第8周各個時間點之間的比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.CKD患者血清IS、PCS水平隨著CKD分期增高而逐漸升高，CKD4-5期患者血清IS和PCS濃度顯著性升高。
　　2. CKD4-5期患者血壓、Scr、BUN、CysC和血P升高，而ALB、Hb和血Ca降低。
　　3. CKD患者血清LnIS與LnPCS呈正相

18、關(guān)，LnIS、LnPCS與eGFR均呈負(fù)相關(guān)。因此，血清IS、PCS水平有可能成為預(yù)測CKD患者腎功能的指標(biāo)。
　　4.血清LnIS只受到eGFR的影響，血清LnPCS受到eGFR、TG和收縮壓的影響，eGFR對血清IS、PCS濃度影響最大。故保護(hù)腎功能，延緩CKD進(jìn)展，可降低血清IS、PCS水平，減輕蛋白結(jié)合類毒素對腎臟及心血管的損害，改善CKD患者預(yù)后。
　　5.口服OLIGOTM蜜煉益生元A6降低CKD3-5期患者血清