茶枝柑果肉及六種荷葉抗氧化活性的研究.pdf

1、（一）茶枝柑果肉
　　茶枝柑果肉是茶枝柑（Citrus reticulata‘Chachi’）的干燥成熟的果肉，柑橘果肉中富含黃酮類（flavonoids）、多糖類、維生素C（Vitamin C）等生物活性成份。廣陳皮為茶枝柑的干燥成熟果皮，為廣東道地藥材，是藥食兩用的藥材品種，具有悠久的歷史。然而，每年有大量的茶枝柑果肉被丟棄，造成了資源的嚴(yán)重浪費(fèi)。因此，茶枝柑果肉的開發(fā)利用尤為必要。本論文以茶枝柑果肉為原料，利用現(xiàn)代分離分析手

2、段，對(duì)茶枝柑果肉的生物活性成份及其體內(nèi)外抗氧化活性進(jìn)行了研究，以期為茶枝柑果肉資源的開發(fā)利用提供依據(jù)。
　　茶枝柑果肉的研究?jī)?nèi)容以及結(jié)果，概括如下：
　　1.茶枝柑果肉與皮提取物的總黃酮測(cè)定方法的建立
　?。?）通過(guò)對(duì)比色法、國(guó)標(biāo)法、紫外分光光度法三種方法的比較篩選，最終確定選用紫外分光光度法，在285nm波長(zhǎng)處，以橙皮苷為對(duì)照品，直接測(cè)定茶枝柑果肉的總黃酮的含量。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知：橙皮苷在4.056~24.34μg·m

3、l-1濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；線性回歸方程為：A=0.029C+0.0020，相關(guān)系數(shù)r=0.9999；加樣回收率在98.49~100.6％范圍內(nèi)；總黃酮的平均含量為1.53 g·100g-1。本法用于茶枝柑果肉總黃酮含量的測(cè)定，方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
　?。?）通過(guò)對(duì)比色法、國(guó)標(biāo)法、紫外分光光度法三種方法的比較篩選，最終確定選用紫外分光光度法，在285nm波長(zhǎng)下，以橙皮苷為對(duì)照品，直接測(cè)定茶枝柑皮提取物提取物中總黃酮的含量。由

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知：在4.0~24.0μg·ml-1濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；線性回歸方程為：A=0.0281C+0.0043，相關(guān)系數(shù)r=0.9999；測(cè)定結(jié)果為35.5g·100g-1。本法用于茶枝柑皮提取物提取物的總黃酮含量的測(cè)定，方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
　　2.茶枝柑果肉與皮的橙皮苷含量測(cè)定方法的建立
　　采用HPLC法，通過(guò)對(duì)流動(dòng)相組成、保留時(shí)間、流速、柱溫等進(jìn)行篩選考察，確定茶枝柑果肉中橙皮苷的最佳測(cè)定條件。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5、得知：橙皮苷在10.00-160.00μg·ml-1濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；線性回歸方程為：A=32.63C-31.211，相關(guān)系數(shù) r=0.9999；加樣回收率在98.10~99.68％范圍內(nèi)；茶枝柑果肉中橙皮苷平均含量為0.998 g·100g-1。本法用于茶枝柑果肉橙皮苷的含量測(cè)定，方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。
　　3.茶枝柑果肉與皮提取物的粗多糖的含量測(cè)定
　?。?）采用國(guó)標(biāo)法測(cè)定茶枝柑果肉粗多糖的含量，測(cè)定結(jié)果為7.7

6、4 g·100g-1。
　　（2）采用國(guó)標(biāo)法測(cè)定茶枝柑皮提取物提取物的含量，測(cè)定結(jié)果為8.54 g·100g-1。
　　4.茶枝柑果肉VC和總酸度的含量測(cè)定
　?。?）采用碘量法測(cè)定茶枝柑果肉中VC的含量，測(cè)定結(jié)果為0.0584g·100g-1。
　　（2）以檸檬酸為標(biāo)準(zhǔn)，采用酸堿滴定法測(cè)定茶枝柑果肉的總酸度，測(cè)定結(jié)果為3.92g·100g-1。
　　5.茶枝柑果肉不同溶劑提取物的體外抗氧化研究
　　

7、采用Fenton、DPPH和 FRAP三種方法測(cè)定茶枝柑果肉的水、60％乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚提取物的抗氧化活性，并且對(duì)其抗氧化活性成份進(jìn)行了相關(guān)性分析。結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)，隨著茶枝柑果肉質(zhì)量濃度的增高，其體外抗氧化活性也隨之增高。茶枝柑果肉的體外抗氧化活性與總黃酮含量的相關(guān)性較大，然而與粗多糖含量的相關(guān)性不大。其中，F(xiàn)enton法中，石油醚提取物EC50最小，抗氧化能力最強(qiáng)；DPPH法中，乙酸乙酯提取物EC50最小，抗氧化

8、能力最強(qiáng)；FRAP法中，正丁醇提取物EC50最小，抗氧化能力最強(qiáng)。
　　5.茶枝柑果肉的體內(nèi)抗氧化研究
　　（1）采用急毒法確定KM小鼠的茶枝柑果肉最大耐受劑量，結(jié)果7.5g·kg-1。
　?。?）評(píng)價(jià)不同D-gal生理鹽水注射劑量對(duì)KM小鼠血漿MDA含量的影響，確定D-gal生理鹽水對(duì)KM小鼠的最佳致衰劑量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較，注射0.6 g·kg-1D-gal劑量后能夠顯著地增高KM小鼠血漿MDA含量，并且

9、具有顯著性差異（p<0.05，p<0.01），因此，確定0.6 g·kg-1D-gal生理鹽水劑量為對(duì)KM小鼠的最佳致衰劑量。
　　（3）通過(guò)測(cè)定不同茶枝柑果肉灌胃劑量對(duì)KM小鼠血漿組織總SOD、GSH-PX活力及MDA含量的影響，評(píng)價(jià)茶枝柑果肉的體內(nèi)抗氧化活性。試驗(yàn)結(jié)果表明：與模型組比較，低、中、高三個(gè)劑量組均能提高血漿、肝臟、腦組織總SOD活力，且中劑量組具有顯著性差異（p<0.05，p<0.01）；與模型組比較，低、中、高三

10、個(gè)給藥組的GSH-Px活力均有提高，且中、高劑量組具有顯著性的差異（p<0.05，p<0.01）；與模型組比較，低、中、高三個(gè)給藥組的MDA含量降低，且高劑量組具有顯著性的差異（p<0.05，p<0.01）。因此，茶枝柑果肉對(duì)KM小鼠具有一定的體內(nèi)抗氧化活性。
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　　荷葉屬睡蓮科植物（Nelumbo nucifera Gertn.）的葉片，富含生物堿和黃酮類兩大主要活性成分，具有清熱解暑，升發(fā)清陽(yáng)，涼血止血等功

11、效，且荷葉是一種來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉的原料。目前市場(chǎng)上有關(guān)荷葉類的飲品不是很多，荷葉保健茶飲料將具有廣闊的市場(chǎng)開發(fā)前景。本論文以荷葉為原料，利用現(xiàn)代分離分析手段，對(duì)荷葉的生物活性成份以及體外抗氧化活性進(jìn)行了研究，以期為荷葉資源的充分利用提供數(shù)據(jù)參考。
　　1.六種荷葉的黃酮類物質(zhì)和生物堿的測(cè)定
　?。?）參照《中國(guó)藥典》2010年版，以蘆丁為對(duì)照品，采用硝酸鋁比色法測(cè)定六種荷葉總黃酮的含量，比較六種荷葉總黃酮含量的差異。結(jié)果表

12、明：六種荷葉的總黃酮含量差異不大，其中白十八的總黃酮含量最高。
　?。?）采用HPLC法測(cè)定六種荷葉中蘆丁和槲皮素的含量，比較六種荷葉蘆丁和槲皮素含量的差異。結(jié)果表明：六種荷葉的蘆丁含量差異不大，其中江溪紅蓮的蘆丁含量最高；槲皮素含量差異較大，其中白十八的槲皮素含量最高。
　?。?）采用HPLC法測(cè)定六種荷葉中生物堿的含量，比較六種荷葉的生物堿含量差異。結(jié)果表明，六種荷葉的生物堿含量有所差異，其中中山紅臺(tái)的生物堿含量最高。<

13、br>　　2.六種荷葉提取物的體外抗氧化活性的測(cè)定
　　采用ABTS、DPPH和FRAP三種方法，測(cè)定比較六種荷葉提取物體外抗氧化活性差異，并進(jìn)行抗氧化相關(guān)性分析。結(jié)果表明，在一定范圍內(nèi)，隨著質(zhì)量濃度的增高，六種荷葉的體外抗氧化活性也隨著增高。DPPH自由基清除能力有很大差異，F(xiàn)e3+還原能力有一定的差異，ABTS+自由基清除能力差異不大。除FRAP法與蘆丁和槲皮素的含量相關(guān)性較大外，其他的相關(guān)性不大。DPPH法中，臺(tái)南一號(hào)EC5