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文檔簡介
1、目的:
本研究觀察在載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠動脈粥樣硬化(AS)模型中,檢測小鼠活化T細胞核因子Cl(NFATcl)及血脂表達水平的變化,并探討CD137-CD137L相互作用對ApoE-/-小鼠NFATcl表達的影響及相關機制。
方法:
采用ApoE-/-鼠頸動脈硅膠圈植入法快速制作AS模型,蘇木精-伊紅(HE)染色,用于病理圖像形態(tài)學分析。免疫組織化學法分析頸動脈AS斑塊中N
2、FATc1表達,RT-PCR和WesternBlot及流式細胞術(shù)方法分別檢測小鼠脾臟淋巴細胞中NFATc1蛋白和mRNA的表達。
結(jié)果:
(1)與正常對照組相比,干預組小鼠血清TG、LDL-C、TC顯著升高,HDL-C則顯著降低。
(2)正常對照組血管內(nèi)膜沒有明顯脂質(zhì)、膽固醇及粥樣斑塊形成,血管內(nèi)膜平整光滑,管壁均勻呈半透明狀。術(shù)后ApoE-/-模型鼠血管內(nèi)膜可見膽固醇結(jié)晶,有明顯脂質(zhì)及斑塊形成
3、,內(nèi)含大量泡沫細胞,彈力板變性甚至斷裂,而術(shù)后給予anti-CD137刺激劑后斑塊更顯著,術(shù)后給予anti-CD137L抑制劑后斑塊較正常對照組減少。
(3)正常對照組頸動脈內(nèi)NFATc1不表達,手術(shù)組ApoE-/-小鼠頸動脈斑塊可見NFATc1表達,而術(shù)后體內(nèi)給予anti-CD137刺激CD137-CD137L軸后,免疫組化顯示ApoE-/-小鼠頸動脈AS斑塊中NFATc1表達明顯增強,同時應用anti-CD137L抑制
4、該軸后,ApoE-/-小鼠頸動脈AS斑塊中NFATc1表達顯著減弱。
(4)體內(nèi)腹腔注射anti-CD137特異性刺激CD137-CD137L軸后,脾臟淋巴細胞中NFATcl表達增加;而腹腔注射anti-CD137L特異性阻斷CD137-CD137L軸后,脾臟淋巴細胞中NFATc1表達減少。
(5)體外培養(yǎng)的脾臟淋巴細胞中anti-CD137刺激CD137-CD137L軸后,淋巴細胞NFATc1mRNA和蛋白
5、表達明顯上調(diào),刺激濃度以20μg/mL時作用最強,刺激時間24h最佳。Anti-CD137L特異性抑制CD137-CD137L軸能明顯降低NFATc1mRNA及蛋白表達,濃度以20μg/mL時抑制作用最強,抑制時間24h最佳。
結(jié)論:
(1)CD137-CD137L在動脈粥樣硬化的形成、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
(2)CD137-CD137L相互作用能調(diào)控ApoE-/-小鼠NFATc1的表達。NF
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