版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
探討CD137分子對載脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠)動(dòng)脈粥樣斑塊及血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)鈣化的影響。
方法:
本實(shí)驗(yàn)包括體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)兩部分。(1)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):Apo E-/-小鼠給予高脂飲食誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化及鈣化模型,分別用刺激型CD137抗體、抑制型CD137抗體激活或抑制CD137分子。對各組小鼠主動(dòng)脈行組織形態(tài)學(xué)
2、分析并予Masson染色及ALP染色,用Von kossa染色比較各組斑塊鈣化程度、免疫組化染色檢測斑塊中骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein2,BMP-2)及Runx2蛋白表達(dá)水平。(2)體外實(shí)驗(yàn):采用組織塊貼壁法分離、培養(yǎng)C57BL/6J小鼠主動(dòng)脈VSMCs,免疫熒光染色鑒定細(xì)胞純度;用β-甘油磷酸鈉誘導(dǎo)VSMCs鈣化,以刺激型CD137抗體、抑制型CD137抗體激活或抑制CD137分子;細(xì)胞鈣化及細(xì)
3、胞內(nèi)鈣離子含量分別采用von kossa染色和甲基百里香酚藍(lán)法檢測,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測各組VSMCs骨形成相關(guān)蛋白BMP-2和Runx2 mRNA的表達(dá)水平、蛋白印跡法(Western blot)檢測BMP-2、Runx2蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果:
(1)各組內(nèi)均可見小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及粥樣斑塊形成。給予刺激型CD137抗體激活CD137分子后,小鼠粥樣斑塊及鈣化面積增加,血管壁肌纖維減少,斑塊內(nèi)
4、見大量圓形或橢圓形、胞質(zhì)嗜堿性的骨樣細(xì)胞生成;而同時(shí)給予抑制型CD137抗體可部分逆轉(zhuǎn)這種現(xiàn)象。
?。?)ALP染色結(jié)果顯示,ALP在鈣鹽沉積部位活性較高,CD137刺激組斑塊內(nèi)ALP活性較對照組明顯升高;而CD137抑制組斑塊內(nèi)ALP活性較刺激組下降。
?。?)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,對照組粥樣斑塊中BMP-2、Runx2表達(dá)較低;CD137刺激組BMP-2和Runx2的表達(dá)顯著增加;而CD137抑制組BMP-2、R
5、unx2的表達(dá)量與CD137刺激組相比有所下降。
?。?)組織塊貼壁法分離、培養(yǎng)的小鼠VSMCs可見“谷峰樣”生長;第3代細(xì)胞經(jīng)免疫熒光鑒定其純度達(dá)95%。
(5)VSMCs經(jīng)刺激型CD137抗體處理后,VSMCs的鈣化較對照組而言明顯加重;而經(jīng)過額外的抑制型CD137抗體預(yù)處理后,刺激型CD137抗體的這種加強(qiáng)VSMCs鈣化的作用被削弱。
?。?)CD137刺激組VSMCs鈣含量和ALP活性較對照組增加(分別
6、為P<0.01,P<0.05),而CD137抑制組VSMCs鈣含量、ALP活性較刺激組均下降(分別為P<0.01,P<0.05)。
?。?)刺激型CD137抗體處理 VSMCs后,細(xì)胞內(nèi)BMP-2、Runx2的mRNA及蛋白表達(dá)水平較對照組升高;予抑制型CD137抗體預(yù)處理后,BMP-2、Runx2 mRNA及蛋白表達(dá)水平較刺激組下降。
結(jié)論:
?。?)激活CD137能夠促進(jìn)ApoE-/-小鼠粥樣斑塊及VSMC
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- CD137和CD28分子對衰老T細(xì)胞功能調(diào)控作用的研究.pdf
- CD137分子在亞急性衰老小鼠模型T細(xì)胞上表達(dá)的研究.pdf
- 乏氧及CD137通路對DC功能的影響.pdf
- CD137分子通過微小RNA-145A-5p調(diào)控ApoE---小鼠活化T細(xì)胞核因子C1表達(dá).pdf
- 干預(yù)CD137-CD137L軸對ApoE-1-小鼠NFATcl表達(dá)的影響.pdf
- CD137信號對CIK細(xì)胞增殖和功能調(diào)節(jié)的研究.pdf
- CD137信號通過Smad1-5-NFATc1信號調(diào)控血管新生.pdf
- 共刺激分子CD137在兒童喘息性肺炎發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf
- ⅰ.sgvhd發(fā)生的免疫機(jī)制研究;ⅱ.cd137和cd137l的表達(dá)及其功能研究
- 益氣補(bǔ)腎中藥對自然流產(chǎn)模型小鼠CD28、CD152分子、孕酮影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 59581.小鼠cd1.1分子的克隆與表達(dá)
- CD137在內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)及功能研究.pdf
- CD137及CD137L在喉癌組織中的表達(dá)及其與喉癌臨床因素及凋亡的關(guān)系.pdf
- 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性肝炎小鼠脾臟CD4+T細(xì)胞上CD137的表達(dá)及其意義.pdf
- AIM2分子對小鼠體內(nèi)鼠痘病毒增殖的影響.pdf
- CD28拮抗性類肽、CD137結(jié)合肽的篩選及生物活性測定.pdf
- 共刺激分子CD137L對HBsAg重組疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答的佐劑作用.pdf
- CD226分子在小鼠腦內(nèi)的表達(dá)及其功能的初步研究.pdf
- 小鼠PTA1-CD226分子的基因克隆及其表達(dá)、分布和功能研究.pdf
- CD226分子與臨床疾病的關(guān)系及其分子機(jī)制.pdf
評論
0/150
提交評論