蜘蛛香提取物體外抗結(jié)腸癌作用研究.pdf

1、目的：研究敗醬科(Valerianaceae)纈草屬(Valeriana Linn)植物蜘蛛香(Valerianajatamansi Jones)提取物對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖抑制和抗轉(zhuǎn)移作用。
　　 方法：以總黃酮為指標(biāo)，通過正交法篩選蜘蛛香超聲提取的最佳工藝，通過大孔吸附樹脂純化除雜得到所需蜘蛛香提取物。采用紫外分光光度法測定蜘蛛香提取物中總黃酮的含量，采用HPLC測定其橙皮苷、槲皮素、芹菜素的含量。通過MTT法、細(xì)胞

2、脫落實(shí)驗(yàn)、病理觀察、流式細(xì)胞儀檢測觀察蜘蛛香提取物和橙皮苷、芹菜素對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖抑制、促進(jìn)凋亡等作用；通過劃痕實(shí)驗(yàn)、同質(zhì)性粘附實(shí)驗(yàn)觀察其抗結(jié)腸癌SW480細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用。
　　 結(jié)果：以總黃酮為指標(biāo)，經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)篩選，確定蜘蛛香超聲提取最佳工藝為65％乙醇、20倍量提取20分鐘、提取3次。采用紫外分光光度法進(jìn)行樣品總黃酮含量測定，計(jì)算得蜘蛛香中總黃酮含量為2.27％，經(jīng)大孔吸附樹脂處理后浸膏中總黃酮含量為3.47％。采

3、用高效液相色譜法測定樣品中橙皮苷、槲皮素和芹菜素含量，計(jì)算得蜘蛛香中橙皮苷含量為0.34％，槲皮素含量較低，無法測出，芹菜素含量為0.0009％；經(jīng)大孔吸附樹脂處理后樣品中橙皮苷含量為2.99％，槲皮素含量為0.04％，芹菜素含量為0.05％。應(yīng)用MTT法檢測蜘蛛香大孔樹脂提取物、橙皮苷、芹菜素和5-氟尿嘧啶(5-FU)對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖的抑制作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在作用24h后，各組藥物在實(shí)驗(yàn)劑量下均能有效抑制SW480細(xì)胞的

4、增殖，蜘蛛香提取物組、橙皮苷組、芹菜素組與5-FU組比較無顯著性差異。細(xì)胞脫落實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，與空白對(duì)照組相比，各藥物組均能增強(qiáng)細(xì)胞的脫落率，抑制細(xì)胞的增殖，具有極顯著性差異(P＜0.01)。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，各藥物組給藥24h后，與空白對(duì)照組相比，均能顯著提高腫瘤細(xì)胞的凋亡率(P＜0.01)；且蜘蛛香提取物組和橙皮苷組G0/G1期細(xì)胞數(shù)明顯降低，而S期和G2/M期細(xì)胞百分比與空白對(duì)照組相比均有明顯增加。病理觀察顯示，光鏡下各組細(xì)

5、胞均表現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞的特征，如細(xì)胞形狀不規(guī)則、核大、核漿比例大、多核仁等。其中空白對(duì)照組少見有凋亡形態(tài)的細(xì)胞出現(xiàn)，而各用藥組均可見有細(xì)胞凋亡的典型形態(tài)學(xué)變化出現(xiàn)，如細(xì)胞體積縮小、變圓，細(xì)胞膜完整，細(xì)胞核固縮、染色質(zhì)凝聚深染。
　　 劃痕實(shí)驗(yàn)表明，蜘蛛香提取物和芹菜素均能顯著降低結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的移動(dòng)能力(P＜0.05)，其中芹菜素的效果最強(qiáng)。對(duì)SW480細(xì)胞同質(zhì)性粘附率的影響，各組藥物之間沒有明顯差異。
　　 結(jié)論：經(jīng)

6、正交實(shí)驗(yàn)篩選，蜘蛛香超聲提取最佳工藝為65％乙醇、20倍量提取20分鐘、提取3次。進(jìn)一步經(jīng)大孔吸附樹脂純化除雜得到的蜘蛛香提取物中，總黃酮、橙皮苷、芹菜素和槲皮素的含量顯著增加，含量分別為3.47％、2.99％、0.04％和0.05％。蜘蛛香提取物和橙皮苷、芹菜素能夠顯著抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞于S期和G2M期，對(duì)其移動(dòng)能力也有明顯的影響，表明物蜘蛛香提取物及其有效成分對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞有明顯的增殖抑