復(fù)方芪參提取物體外抗瘢痕疙瘩作用及其作用機(jī)制.pdf

1、瘢痕疙瘩是一種以細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)成分,尤其是膠原組織過(guò)度沉積導(dǎo)致的纖維增生性疾病。目前研究認(rèn)為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)是瘢痕疙瘩最關(guān)鍵的致病因子,能刺激成纖維細(xì)胞增殖及合成膠原,從而導(dǎo)致ECM沉積及纖維化。對(duì)于瘢痕疙瘩的發(fā)病機(jī)制,已有研究表明TGF-β1/Smad信號(hào)途徑起重要作用,近些年來(lái),對(duì)于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(

2、keloid fibroblasts,KFs)內(nèi)磷酸化Smad蛋白的研究很多,但大多數(shù)僅僅局限于經(jīng)由TβRI途徑的C末端磷酸化的研究。本課題組已經(jīng)報(bào)道了TGF-β1不僅能夠誘導(dǎo)KFs內(nèi)Smad蛋白C末端的磷酸化,而且還證實(shí)TGF-β1對(duì)Smad蛋白連接區(qū)的磷酸化具有高度的誘導(dǎo)作用,初步確認(rèn)Smad蛋白連接區(qū)為瘢痕疙瘩的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵位點(diǎn)。
　　前期研究已經(jīng)報(bào)道復(fù)方芪參提取物(compound astragalus and s

3、alvia miltiorrhiza extracts,CASE)通過(guò)干擾TGF-β1/Smad信號(hào)途徑,發(fā)揮其抗肝纖維化作用,并且抑制HepG2細(xì)胞的增殖。為探討CASE對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的KFs的增殖,膠原合成以及侵襲能力的影響,以及CASE對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的KFs內(nèi)Smad蛋白連接區(qū)域磷酸化的影響,分別采用MTT,3H-脯氨酸摻入,Transwell小室,細(xì)胞免疫熒光染色方法,結(jié)果如下:
　　1.CASE抑制血清誘導(dǎo)的KF

4、s增殖
　　CASE(15～60 mg·L-1)能夠呈濃度依賴(lài)性地抑制10％血清(new bovine serum, NBS)所刺激的KFs增殖。 CASE的半抑制濃度(IC50)為18.90 mg·L-1。
　　2.CASE對(duì)KFs膠原合成的抑制作用
　　TGF～β1(40 pmol·L-1)與15%NBS均可刺激KFs膠原的合成。CASE(3.75～60 mg·L-1)不僅呈濃度依賴(lài)性抑制TGF-β1誘導(dǎo)的KFs膠

5、原合成,而且CASE(7.5～60 mg·L-1)可抑制血清所刺激的KFs膠原合成。CASE對(duì)NBS及TGF-β1誘導(dǎo)的KFs膠原合成的IC50分別為6.49 mg·L-1和4.20 mg·L-1。
　　3.CASE對(duì)KFs侵襲能力的抑制作用
　　TGF-β1(40 pmol·L-1)與15%NBS分別能明顯增強(qiáng)KFs的侵襲能力。CASE(7.5～30 mg·L-1)顯著抑制TGF-β1增強(qiáng)的侵襲能力,CASE(15～30

6、mg·L-1)顯著抑制NBS增強(qiáng)的侵襲能力。CASE對(duì)NBS及TGF-β1誘導(dǎo)的KFs侵襲能力的IC50分別為19.70 mg·L-1和12.37 mg·L-1。而CASE與TGF-β1對(duì)NFs的侵襲能力均無(wú)明顯影響。
　　4.CASE對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的KFs內(nèi)pSmad2L和pSmad3L蛋白表達(dá)的抑制作用
　　經(jīng)采用細(xì)胞免疫熒光染色法檢測(cè)的結(jié)果顯示:TGF-β1(40 pmol·L-1)能夠使pSmad2L及pSmad

7、3L蛋白表達(dá)明顯增加,同時(shí)能刺激其轉(zhuǎn)位入核;CASE(7.5～30 mg·L-1)不但明顯抑制TGF-β1誘導(dǎo)的KFs細(xì)胞pSmad2L及pSmad3L磷酸化蛋白的表達(dá)增加,而且能夠抑制其轉(zhuǎn)位入核。TGF-β1與CASE對(duì)NFs內(nèi)Smad2/3蛋白磷酸化均無(wú)明顯影響。
　　綜上所述,CASE具有明顯抑制 KFs的增殖、膠原合成及其侵襲能力,明顯抑制TGF-β1誘導(dǎo)的KFs內(nèi)Smad2/3蛋白連接區(qū)磷酸化,提示,CASE可能通過(guò)干擾