核因子κB、TNF-a、IL-6在PCOS大鼠模型中的表達(dá)及二甲雙胍的干預(yù)研究.pdf

1、目的：1、建立可靠的PCOS大鼠模型，并設(shè)計二甲雙胍的給藥干預(yù)，研究NF-κB、IL-6、TNF-a在正常組、PCOS組、二甲雙胍干預(yù)組大鼠的表達(dá)，及與終體質(zhì)量、T、LH、HOMA-IR、E2表達(dá)的相關(guān)性，了解NF-κB及炎癥因子在PCOS中的作用；2、研究二甲雙胍對NF-κB、IL-6、TNF-a及終體質(zhì)量、T、LH、HOMA-IR、E2表達(dá)的影響，為臨床治療提供實驗依據(jù)；3、探討二甲雙胍對多囊卵巢大鼠的促排卵作用及可能的機(jī)制。

2、>　　方法：將32只雌性S/D大鼠隨機(jī)分為三組，正常對照組（A組，n=10）：自由攝取食物和水31d；PCOS組(B組，n=12)：來曲唑1mg/kg灌胃21d后予以2.6mL/kg生理鹽水灌胃10d；二甲雙胍干預(yù)組（C組，n=10）：來曲唑1mg/kg灌胃21d后予以6％的二甲雙胍2.6mL/kg灌胃10d。每日陰道涂片及稱重，測定各組大鼠血清E2、T、LH、FPG、FINS水平，通過HE染色觀察卵巢形態(tài)，通過免疫組化、熒光定量PCR

3、方法監(jiān)測各組大鼠卵巢NF-κBp65蛋白及mRNA的表達(dá)，通過Elisa測定各組大鼠循環(huán)中IL-6、TNF-a的表達(dá)，通過RT-PCR測定各組大鼠卵巢IL-6、TNF-a mRNA的相對表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.用來曲唑1mg/kg灌胃共21天，模型組大鼠于造模第9天均失去動情周期，卵巢病理多囊改變，并具有高雄激素血癥和胰島素抵抗的特點，建立近似于人類PCOS的動物模型；
　　2.PCOS組大鼠血清TNF-a顯著高于

4、正常對照組（P<0.05），二甲雙胍干預(yù)組血清TNF-a較PCOS組顯著下降（P<0.05）；血清IL-6水平在三組大鼠間無顯著性差異（P>0.05）；PCOS大鼠二甲雙胍干預(yù)后血清INS、T、LH顯著下降；
　　3.各指標(biāo)之間進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，很多各指標(biāo)之間存在相關(guān)，形成惡性循環(huán)；在相關(guān)的基礎(chǔ)上進(jìn)行多元線性回歸分析：TNF-a和體質(zhì)量是引起胰島素抵抗的獨(dú)立影響因素,可能是胰島素抵抗的機(jī)制之一；T和IL6對體質(zhì)量具有顯

5、著性影響；IL-6是除HOMA-IR外，對T的獨(dú)立影響因子；
　　4.在二甲雙胍藥物干預(yù)的第6天，二甲雙胍組大鼠均出現(xiàn)動情周期，恢復(fù)排卵；而PCOS組持續(xù)處于動情間期，提示無排卵，直到第10天12只中僅1只恢復(fù)動情周期。二甲雙胍干預(yù)組大鼠的卵巢形態(tài)均恢復(fù)正常，而PCOS組大鼠的卵巢形態(tài)仍為多囊改變；
　　5.PCOS大鼠卵巢局部TNF-a、IL-6 mRNA的表達(dá)較正常對照組增高（P<0.05），二甲雙胍干預(yù)組大鼠卵巢局部炎

6、癥因子mRNA的表達(dá)較PCOS組顯著減少（P<0.05）；
　　6.卵巢組織免疫組化顯示：NF-κB P65均一致性的表達(dá)在卵巢顆粒細(xì)胞的細(xì)胞核，但各組之間的表達(dá)無明顯統(tǒng)計學(xué)差別（P>0.05），熒光定量PCR檢測卵巢組織NF-κB P65 mRNA的表達(dá)，各組之間未發(fā)現(xiàn)顯著性差別（P>0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.S/D大鼠來曲唑建?？勺鳛檠芯縋COS的理想動物模型；
　　2.本PCOS大鼠模型存在慢性低度

7、炎癥，可能由于臨床異質(zhì)性，主要反映在TNF-a水平的升高，二甲雙胍的干預(yù)顯示有益的作用；
　　3.TNF-a是引起PCOS胰島素抵抗的獨(dú)立影響因素，IL-6是PCOS體質(zhì)量的獨(dú)立影響因素，可用于預(yù)測發(fā)生的風(fēng)險性；
　　4.二甲雙胍具有良好的促排卵作用，能恢復(fù)卵巢正常形態(tài)，卵巢局部炎癥因子的改變可能直接參與發(fā)病機(jī)制；
　　5.炎癥因子的變化并不是通過NF-κB介導(dǎo)，可能存在其他信號通路，或者與PCOS臨床表現(xiàn)的異質(zhì)性有關(guān)