二甲雙胍腎保護與調(diào)節(jié)NGAL及炎癥因子的臨床研究.pdf

1、本研究首先驗證了血清和尿液中NGAL、IL-10、IL-6、TNF-α等炎癥因子在2型糖尿病(Type2 diabetesmellitus，T2DM)患者中的表達情況及其與蛋白尿的相關(guān)性，隨后觀察T2DM患者服用二甲雙胍不同劑量、不同療程后，蛋白尿水平和NGAL、IL-10、IL-6、TNF-α等炎癥因子的變化，以探討二甲雙胍在DKD中的作用、治療價值及可能機制，為二甲雙胍在DKD中的防治和應用提供重要的理論依據(jù)。
　　第一部分

2、血、尿NGAL蛋白的測定在糖尿病腎臟疾病中的價值以及與炎癥因子的相關(guān)性研究
　　目的:觀察血、尿NGAL以及部分炎癥因子在2型糖尿病腎臟疾病體內(nèi)的變化，探討NGAL是否是與微炎癥有關(guān)的糖尿病腎臟疾病早期診斷和監(jiān)測病情的標志物。
　　方法:(1)收集93例安徽省立醫(yī)院門診和體檢的T2DM（世界衛(wèi)生組織診斷指南1999版）數(shù)據(jù)，并患者根據(jù)尿白蛋白水平分為三組，正常白蛋白尿組(Normalalbuminuria，NA組)31例、微

3、量白蛋白尿組（Microalbuminuria，MA組）31例和大量白蛋白組(Clinical albuminuria，CA組)31例;正常對照組(Normal control，NC組)31例均為我院體檢的非糖尿病人群。所有患者測量身高、體重等人體指標。隔夜8小時空腹采集靜脈血，分別測定空腹血糖(Fasting plasma glucose，F(xiàn)BG)、糖化血紅蛋白(glycosylated haemoglobin A1c，HbA1c)、

4、血脂、血肌酐(serum creatinine，SCr)、血NGAL、血白介素-10(Interleukin-10，IL-10)、血白介素-6(Interleukin-6，IL-6)以及血腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)等。留取晨起清潔中段尿，分別測定尿白蛋白(Urinary albumin，UA1b)、尿肌酐(Urinary creatinine，UCr)、尿NGAL、尿單核細胞趨化蛋白-1(m

5、onocytechemoat-tractant protein-1，MCP-1)。(2)用酶聯(lián)免疫吸附分析方法(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)法測定空腹血清NGAL、IL-10、IL-6、TNF-α和尿NGAL、MCP-1水平;免疫比濁法測定UA1b;肌氨酸氧化酶法測定SCr、UCr;用葡萄糖氧化酶法測定血漿FBG，用酶法測定血脂水平;HbA1c測定采用高效液相色譜法。(3)分析各組糖脂代

6、謝指標、炎癥細胞因子、尿微量白蛋白及血肌酐等腎臟功能指標的差別，體內(nèi)NGAL的變化趨勢以及與上述指標的相關(guān)性。統(tǒng)計分析采用SPSS16.0軟件。數(shù)值變量資料用均數(shù)±標準差表示。兩樣本均數(shù)的比較用t檢驗，多個樣本均數(shù)的比較用方差分析SNK法;變量的影響因素分析用逐步線性回歸法。
　　結(jié)果:(1)與NC組相比，T2DM組血清中NGAL(84.95±127.30ng/mlvs.30.66±11.66ng/ml)、 IL-6(11.72±

7、2.54pg/ml7.1vs.9±2.19pg/ml)、TNF-α(9.87±2.08pg/ml vs.5.84±1.56pg/ml)的水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。尿中 NGAL(51.24±35.85ng/ml vs.16.15±3.52ng/ml)、MCP-1(98.40±28.25pg/ml vs.57.12±14.5pg/ml)的水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。血IL-10（2.31±0.70

8、pg/ml vs.28±1.15 pg/ml）水平顯著減低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(2)與NC組相比，NA組血NGAL（43.26±10.70ng/mlvs.30.66±11.66ng/ml）、尿NGAL（20.39±4.32ng/ml vs.16.15±3.52ng/ml）水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)T2DM組間比較:三組間尿MCP-1(122.13±24.16pg/ml vs.92.37±28.

9、31pg/ml8 vs.0.69±10.91pg/ml)、血TNF--α(11.26±1.88pg/ml vs.110.27±1.74pg/ml vs.8.07±1.10pg/ml)差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且隨著尿蛋白水平的降低而逐漸遞減。CA組的HBA1C和MA組（6.96±1.17mmol/l vs.7.25±1.02mmol/l）、NA組（6.96±1.17mmol/lvs.6.19±0.53mmol/l）差異有統(tǒng)計學意

10、義(P＜0.05);三組間尿NGAL(97.33±20.66ng/ml3 vs.6.00±8.78ng/ml vs.20.39±4.32ng/ml)差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，隨尿蛋白水平降低而逐漸遞減;CA組的血NGAL顯著高于MA組（143.50±208.82ng/ml vs.68.08±18.55ng/ml）和NA組(143.50±208.82ng/mlvs.43.26±10.70ng/ml)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05

11、)。(4)逐步線性回歸顯示在T2DM患者中尿白蛋白/肌酐(Urinary albumin/creatinine，UACR)(t=445.034，P＜0.001)、血TNF--α(t=13.822，P＜0.001)是尿NGAL影響因子，與尿NGAL呈正相關(guān)關(guān)系。糖化血紅蛋白(t=3.266，P=0.002)、尿ACR(t=2.065，P=0.011)是血NGAL影響因子，與血NGAL呈正相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　T2DM體內(nèi)

12、存在炎癥細胞因子水平的變化，炎癥可能在DKD發(fā)病機制和疾病進展中起著重要作用。NGAL在T2DM正常白蛋白尿時就已經(jīng)明顯增高，且與UACR正相關(guān)。血、尿NGAL是DKD敏感的早期診斷和監(jiān)測病情的指標。NGAL可能作為慢性炎癥和糖代謝紊亂中一個重要的連結(jié)點，參與了DKD的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分 二甲雙胍對2型糖尿病患者的腎保護作用以及與NGAL及炎癥細胞因子的關(guān)系
　　目的:觀察不同劑量和不同療程的二甲雙胍對T2DM患者尿白

13、蛋白和體內(nèi)NGAL及炎癥細胞因子水平的影響，探討二甲雙胍在DKD中的作用、治療價值及可能機制，為二甲雙胍在DKD中的防治和應用提供重要的理論依據(jù)。
　　方法:(1)281例在安徽省立醫(yī)院體檢的T2DM（世界衛(wèi)生組織診斷指南1999版）患者根據(jù)其接受的抗糖尿病藥物治療方案分為二甲雙胍組(n=112)和非二甲雙胍組(n=169)。二甲雙胍治療組根據(jù)服藥劑量分為:1g/d組(n=91)，1.5g/d組(n=21)。同時根據(jù)服用二甲雙胍的

14、療程分為小于1年組(n=71)，大于1年組(n=41)。所有患者隔夜8小時空腹采集靜脈血，分別測定FBG、血脂、HbA1c、SCr、NGAL、IL-10、IL-6、TNF-α等。留取晨起清潔中段尿，分別測定UA1b、UCr、尿NGAL、MCP-1，同時測量身高、體重等人體指標。(2)用ELISA法測定空腹血清NGAL、IL-10、IL-6、TNF-α和尿NGAL、MCP-1水平;免疫比濁法測定UA1b;肌氨酸氧化酶法測定SCr、UCr;

15、用葡萄糖氧化酶法測定血漿空腹血糖，用酶法測定血脂水平;HbA1c測定采用高效液相色譜法。(3)分析各組糖脂代謝指標、體內(nèi)NGAL、炎癥因子、尿微量白蛋白及血肌酐等腎臟功能指標的差別。統(tǒng)計分析均通過Graphpad Prism軟件進行，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用均數(shù)±標準差，兩組均數(shù)之間的差異，采用t檢驗;不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用中位數(shù)（四分位數(shù)），兩組差異采用wilcoxon秩和檢驗，多個實驗組與對照組的比較采用方差分析(Dunnet

16、t檢驗)。
　　結(jié)果:(1)與非二甲雙胍組相比，二甲雙胍組UACR[21.27(17.72，25.57)mg/gvs.26.71(23.52,29.13)mg/g]、血NGAL(49.00±20.83ng/mlvs.64.26±22.15ng/ml)、尿MCP-1(113.85±18.31pg/ml vs.122.46±25.82pg/ml)水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);二甲雙胍組血清IL-6（11.52±2.5

17、7pg/ml vs.13.35±3.15 pg/ml）的水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(2)與二甲雙胍(1g/d)組相比，二甲雙胍(1.5g/d)組尿MCP-1（97.46±18.62pg/mlvs.117.64±16.10pg/ml）、尿ACR[15.32(12.52，20.16)mg/g vs.22.13(19.45，26.32)mg/g]水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)與二甲雙胍療程小于1年

18、組相比，療程大于1年組血IL-10（2.42±0.67pg/ml vs.2.71±0.59pg/ml）水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。尿NGAL(24.51±14.47ng/ml vs.35.57±32.47ng/ml)水平顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　二甲雙胍能夠降低T2DM患者的尿白蛋白，有確切的腎臟保護作用。二甲雙胍能夠降低T2DM患者體內(nèi)促炎細胞因子和NGAL水平，其保

19、護腎臟作用可能和調(diào)節(jié)體內(nèi)NGAL及炎癥因子有關(guān)。二甲雙胍抗炎和保護腎臟作用可能為時間和劑量依賴。
　　全文結(jié)論:
　　1.T2DM體內(nèi)存在炎癥細胞因子水平的變化，炎癥可能在DKD發(fā)病機制和疾病進展中起著重要作用。
　　2.NGAL可能以炎癥相關(guān)因子的身份參與DKD的發(fā)生發(fā)展。血、尿NGAL是DKD敏感的早期診斷和監(jiān)測病情的指標。
　　3.二甲雙胍在T2DM中有腎臟保護作用，可能和其調(diào)節(jié)體內(nèi)NGAL及炎癥因子有關(guān)。