骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)合地塞米松對潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠的治療作用.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種自身免疫性疾病，病情常反復發(fā)作，傳統(tǒng)的治療手段只對輕中型患者有效，對部分嚴重患者，治療方案的選擇有限。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)在體內(nèi)能夠分化為多種中胚層組織細胞，并且可以向損傷、炎癥或腫瘤部位遷移。在體外很容易分離和擴增，一定條件下可以分化為成骨細胞、成脂肪細胞和軟骨細胞等多種細胞。其強大的可塑性及

2、其在治療方面的應用潛力是目前研究的熱點。目前，骨髓間充質(zhì)干細胞靜脈移植后體內(nèi)分布情況及其聯(lián)合地塞米松治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效，國內(nèi)外少有報道。本課題包括骨髓間充質(zhì)干細胞的體外實驗和體內(nèi)實驗兩個部分，重點進行了骨髓間充質(zhì)干細胞的體內(nèi)示蹤、地塞米松和骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)用及其療效評價的實驗研究。
　　 研究目的
　　 1、進行小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的提取、培養(yǎng)、鑒定、染色及潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的制備。
　　 2、觀察回輸?shù)?/p>

3、小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠體內(nèi)的分布。
　　 3、評價地塞米松和骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)用對潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠的治療效果。
　　 研究方法
　　 1、小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的提取、培養(yǎng)、鑒定、染色。
　　 2、制備潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型，進行DAI評分并進行HE染色病理觀察。
　　 3、將DiR染色的小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞通過鼠尾靜脈輸入模型組小鼠體內(nèi)。進行活體熒光成像并制備冰凍切片觀察骨

4、髓間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)的分布。
　　 4、將實驗小鼠隨機分為5組進行骨髓間充質(zhì)干細胞及地塞米松治療，治療結(jié)束后分別于1天、3天、5天3個時間點取血清，于第4天取空腸組織，分別測定不同時間點血清中的D-乳酸(D(-)-lactic acid，D-LAC）、二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO)含量以及結(jié)腸組織中的谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-PX)、超氧化物歧化酶(super

5、oxide dismutase，SOD)活性。
　　 結(jié)果
　　 1、活體熒光成像及離體冰凍切片觀察均發(fā)現(xiàn)結(jié)腸組織有熒光顯像，但活體熒光成像發(fā)現(xiàn)熒光顯像主要集中于肺和肝中。
　　 2、潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠各時間點血清D-LAC、DAO含量高于正常對照組，第4天結(jié)腸組織GSH-PX、SOD活性低于正常對照組。
　　 3、除第5天地塞米松治療組血清D-LAC與空白對照組比較無統(tǒng)計學意義外，地塞米松聯(lián)合BMSC

6、s治療組、地塞米松治療組、BMSCs治療組各時間點血清D-LAC、DAO含量均低于空白對照組且隨時間逐漸下降。各治療組第4天結(jié)腸組織GSH-PX、SOD活性高于空白對照組。
　　 4、地塞米松聯(lián)合BMSCs治療組各時間點血清D-LAC、DAO含量均低于地塞米松治療組及BMSCs治療組。地塞米松聯(lián)合BMSCs治療組第4天結(jié)腸組織GSH-PX、SOD活性高于地塞米松治療組及BMSCs治療組。
　　 結(jié)論
　　 1、體

7、內(nèi)注射的骨髓間充質(zhì)干細胞可定植于潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠腸道組織，但定植于腸道的細胞數(shù)量仍然非常有限，大部分停露于肺組織和肝組織中。其可能機制是小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞平均直徑較大，多數(shù)細胞滯留于肺的微血管處死亡并在肝臟代謝。
　　 2、潰瘍性結(jié)腸炎小鼠較正常對照小鼠，腸道屏障功能和抗膜脂質(zhì)氧化的能力下降。
　　 3、地塞米松聯(lián)合BMSCs、單用地塞米松、單用BMSCs均對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠有較好的治療效果。地塞米松聯(lián)合BMSCs