不同方式注射骨髓間充質(zhì)干細胞對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的實驗研究.pdf

1、目的：
　　1.體外擴增并鑒定骨髓間充質(zhì)干細胞；
　　2.制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型；
　　3.對比通過心臟及鼠尾靜脈兩種方式注射骨髓間充質(zhì)干細胞對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的療效，并分析可能的治療機制。
　　方法：
　　體外擴增培養(yǎng)雄性SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞，利用流式細胞術(shù)鑒定細胞表面抗原CD34、CD44、CD45及CD90的表達，并在一定條件下誘導(dǎo)其向脂肪細胞系、骨細胞系分化。用5％TNBS/乙醇灌腸建立

2、UC大鼠模型，并設(shè)定正常對照組D，觀察大鼠一般情況變化。模型建立后24小時，A組大鼠通過心臟注射干細胞懸液0.5毫升(含干細胞1×106個)，B組由鼠尾靜脈注射干細胞懸液0.5毫升(含干細胞1×106個)，C組由鼠尾靜脈給予等量的生理鹽水，D組不做任何處理，繼續(xù)觀察各組大鼠一般情況變化。移植后7天觀察計算大鼠疾病活動指數(shù)(DAI)評分，并將其處死，光鏡下觀察結(jié)腸組織病理變化，及人性別確定區(qū)Y蛋白(Human Sex-determinin

3、g region Y protein，SRY蛋白)、G-蛋白偶聯(lián)受體5(Leucine-rich repeat containing G protein coupled receptor5，LGR-5)、自殺相關(guān)因子(Factor Associated Suicide，F(xiàn)AS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS)的表達。
　　結(jié)果：
　　1.骨髓間充質(zhì)干細胞有貼壁

4、生長特性，呈長梭形，漩渦狀生長，經(jīng)流式細胞術(shù)檢測，CD34陽性率為0.78%，CD44陽性率99.38%，CD45陽性率0.43%，CD90陽性率為98.78%，且一定條件下有成脂及成骨能力。
　　2.用TNBS/乙醇灌腸后一天，發(fā)現(xiàn)大鼠懶動，大便為稀便，體重下降，灌腸后三天癥狀最為嚴重。
　　3.骨髓間充質(zhì)干細胞移植后，A組大鼠的DAI評分較B組的低，B組大鼠的DAI評分比C組的低，三組不全相等，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=90

5、.603，p<0.05)，但A、B組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。C組結(jié)腸病理見大量淋巴細胞、中性粒細胞浸潤及巨大潰瘍，A組上皮破損范圍較B組小，炎癥狀況較輕；在干細胞注射組的大鼠體內(nèi)均可見SRY蛋白，在A組的分布較B組多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=15.224，p<0.05）；LGR-5在移植組的表達較C組明顯增加，且A組高于B組，三組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=24.7，p<0.05)；Fas在C組的表達高于D組(t=9.494，p<0.05)，F(xiàn)as

6、在移植組的表達較C組降低，且A組較B組低，三組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=38.6，p<0.05)；在干細胞注射組的iNOS的表達較C組下降，并且A組較B組的表達更低，三組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=33.8，p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　經(jīng)心臟注射骨髓間充質(zhì)干細胞對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的療效優(yōu)于經(jīng)鼠尾靜脈注射；其可能有促進腸道干細胞的再生，減輕腸道細胞的凋亡，抑制免疫反應(yīng)，減輕炎癥、氧化應(yīng)激的作用，以此改善潰瘍性結(jié)腸炎模型