針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的染色質(zhì)重塑表觀遺傳調(diào)控機制.pdf

1、目的：
　　研究針灸對葡聚糖硫酸鈉（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS）誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）小鼠模型的療效及染色質(zhì)重塑因子的影響，探討針灸治療UC小鼠模型的染色質(zhì)重塑表觀遺傳調(diào)控機制。
　　方法：
　　以DSS誘導(dǎo)造成小鼠UC模型，給予電針和艾灸“關(guān)元”和“足三里”治療。觀察小鼠一般情況、糞便隱血、疾病活動評分（Disease Activity I

2、ndex，DAI）、腸道病理結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)等療效指標(biāo)；以RT2 PCR ARRAY的方法檢測染色質(zhì)重塑因子表達(dá)的變化；并利用Co-expression Network基因網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建方法構(gòu)建不同狀態(tài)的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，借助String網(wǎng)絡(luò)平臺，構(gòu)建差異基因蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
　　結(jié)果：
　　1．針灸治療UC模型小鼠的療效指標(biāo)分析：
　?。?）UC模型小鼠較正常小鼠一般情況差，可見肉眼血便，DAI評分明顯增高；電針和艾灸治療后，一般

3、狀況明顯好轉(zhuǎn)，血便情況明顯改善，DAI評分均明顯下降，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。而電針和艾灸組之間DAI評分無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(2)光鏡觀察結(jié)果：模型組與空白組比較，具有明顯變化，表現(xiàn)為結(jié)腸黏膜中、重度水腫，充血明顯，腺體結(jié)構(gòu)被破壞，杯狀細(xì)胞增多，有潰瘍面及壞死灶，大量炎性細(xì)胞浸潤；電針組和艾灸組，腺體破壞較模型組輕，黏膜下層輕度水腫，炎細(xì)胞浸潤量少，與模型組相比，更接近空白組，而兩治療組之間無明顯差別。
　　(3)

4、透射電鏡觀察結(jié)果：與空白組比較，模型組細(xì)胞核染色聚集，染色質(zhì)分布不均勻，細(xì)胞內(nèi)空泡增多，線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，微絨毛稀疏，上皮細(xì)胞間隙明顯增寬；電針組及艾灸組與模型組相比更接近空白組，細(xì)胞核染色少量聚集，胞漿內(nèi)線粒體輕度腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)稍微擴張，微絨毛基本正常，上皮細(xì)胞比較正常，兩組之間細(xì)胞微結(jié)構(gòu)無明顯差異。
　　2．針灸治療UC小鼠染色質(zhì)重塑因子表達(dá)的變化：
　　（1）模型組與正常組相比：Brdt、Cdyl2、Phc

5、1表達(dá)升高；Cbx2、Cbx3、Cbx4、Cbx5、Mbd4、Phf21b表達(dá)下調(diào)；電針組與模型組相比：Baz2a、Baz2b、Brd3、Brdt、Brwd1、Cbx1、Cbx2、Cbx3、Cbx4、Cbx6、Cbx7、Cbx8、Chd2、Chd3、Chd5、Chd7、Ing2、Ing4、Ing5、Mbd4、Nab2、Pcgf2、Pcgf3、Pcgf6、Phf1、Phf21b、Phf5a、Smarca2、Spen表達(dá)升高；Smarca4

6、表達(dá)下調(diào)。艾灸組與模型組相比：Cbx2、Cbx3、Cbx4、Cbx6、Cbx7、Cbx8、Chd6、Ing5、Mbd4、Nab2、Pcgf2、Pcgf6、Phf2、Phf21b表達(dá)升高；Cdyl表達(dá)下調(diào)。
　　（2）DSS誘導(dǎo)UC小鼠模型，PcG家族、BMD家族、CHD家族和MBD家族的染色質(zhì)重塑因子參與了表觀遺傳調(diào)控；電針通過對PcG家族、BMD家族、CHD家族、ING家族、MBD家族、NuRD家族和SWI/SNF家族染色質(zhì)重塑

7、因子的影響，艾灸通過對PcG家族、CHD家族、ING家族、MBD家族、NuRD家族染色質(zhì)重塑因子的影響，進(jìn)行表觀遺傳調(diào)控。
　　3．針灸治療UC小鼠染色質(zhì)重塑表觀遺傳學(xué)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果：
　?。?）成功構(gòu)建正常組、模型組、電針組和艾灸組小鼠的染色質(zhì)重塑因子基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。空白組基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)較緊密和復(fù)雜，模型組的網(wǎng)絡(luò)顯得較為單一。電針組和艾灸組的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與空白組較為接近，網(wǎng)絡(luò)關(guān)系趨于豐富，電針組尤甚。模型組關(guān)鍵基因為Cbx5

8、、Cbx6、Cbx3，電針組關(guān)鍵基因為Pcgf1、Brpf1、Ing5、Chd6、Nsd1、Phf6、Ctbp1、Pcgf5、Brd4、Asxl1，艾灸組關(guān)鍵基因為Phc2、Suz12、Brd2、Brwd1、Asxl1。
　　（2）成功構(gòu)建了模型組、電針組、艾灸組染色質(zhì)重塑差異基因蛋白網(wǎng)絡(luò)。模型組Rnf2蛋白起關(guān)鍵作用，主要圍繞PcG家族展開；電針組Smarca2蛋白起關(guān)鍵作用，圍繞SWI/SNF家族和PcG家族展開；艾灸組Rnf

9、2、Phc2等蛋白起關(guān)鍵作用，圍繞PcG家族展開。
　　結(jié)論:
　　1．電針和艾灸治療的UC小鼠的染色質(zhì)重塑過程中具有共同的和不同的因子參與調(diào)控。
　　2．電針和艾灸干預(yù)后，其染色質(zhì)重塑因子的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)接近空白對照組，呈現(xiàn)豐富的、復(fù)雜的、緊密的調(diào)控效果。
　　3．從差異基因蛋白網(wǎng)絡(luò)調(diào)控來看，PcG家族可能是DSS誘導(dǎo)UC小鼠染色質(zhì)重塑的關(guān)鍵；電針和艾灸都通過對PcG家族的影響，從而影響到染色質(zhì)的重塑，達(dá)到治療效