納米級(jí)鈦合金顆粒對(duì)體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究納米級(jí)鈦合金顆粒對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrowmesenchymal stem cells，BMSCs)增殖、凋亡作用及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)影響，探討人工關(guān)節(jié)假體松動(dòng)中納米級(jí)顆粒導(dǎo)致的骨溶解機(jī)制。
　　方法：1.體外采用密度梯度離心法分離兔骨髓單個(gè)核細(xì)胞并通過(guò)貼壁培養(yǎng)純化、擴(kuò)增獲得BMSCs，并通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面抗原CD90、CD105及CD34鑒定細(xì)胞表型。2.電鏡下觀察納米鈦合金顆粒的形態(tài)并測(cè)量其粒

2、徑；將不同濃度的鈦合金顆粒(0.01mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml)與BMSCs共同培養(yǎng)，分別于第6、24、48、72h采用倒置顯微鏡觀察BMSCs的形態(tài)變化，CCK-8法測(cè)定BMSCs增殖情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSCs凋亡率，熒光標(biāo)記法檢測(cè)凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，RT-PCR方法半定量測(cè)定凋亡基因Bax、BCL-2和Caspase-3mRNA的表達(dá)。并用統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：1.采用Percoll

3、密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選法在體外能夠培養(yǎng)出純度較高的BMSCs，流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面抗原CD90、CD105陽(yáng)性和CD34陰性，顯示均一性較好。2.90％顆粒直徑小于100nm；與空白對(duì)照組相比，低濃度組(0.01mg/ml)對(duì)BMSCs增殖影響不明顯(P>0.05)，中(0.05mg/ml)、高(0.1mg/ml)濃度組對(duì)BMSCs增殖均有明顯的抑制作用(P<0.05)，同一時(shí)間抑制作用隨著濃度的增大而增加；不同濃度鈦合金顆粒均能導(dǎo)

4、致BMSCs凋亡(P<0.05)，且凋亡率隨濃度的增大、作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增加；中濃度組(0.05mg/ml)6、24、48及72h各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2mRNA表達(dá)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，Bax、Caspase-3mRNA的表達(dá)在6、24、48、72h時(shí)間點(diǎn)相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)且隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)；在72h不同濃度鈦合金組Bcl-2的mRNA表達(dá)較空白組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同濃度鈦合金組