乙肝病毒變異及STAT3基因多態(tài)性在肝細(xì)胞癌發(fā)生中交互作用的研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是我國重要的惡性腫瘤，其發(fā)生是宿主遺傳因素、環(huán)境因素和病毒感染等多因素參與的漸進(jìn)過程。在我國，乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)慢性感染是HCC最主要的危險因素，HBV基因型、HBVDNA滴度、HBeAg狀態(tài)及HBV基因組變異等都與HCC發(fā)生相關(guān)。我國HBV感染者占全世界1/3，但是HCC發(fā)病數(shù)占全球50％以上，以及世界各地華人人群中HCC患病率普遍較

2、高都提示中國人遺傳易感性在HCC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。炎癥在HBV致癌和預(yù)后方面起重要作用，其中信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signaltransducerandactivatorsoftranscription3，STAT3)是重要炎癥信號通路JAK/STAT中的關(guān)鍵分子，其基因多態(tài)性通過該通路影響靶基因的表達(dá)水平，與HCC的發(fā)生相關(guān)。HBx蛋白可能通過miRNA激活并影響STAT3的水平，HBx與STAT3在HCC的發(fā)生中可能是相互

3、作用的。因此，研究HCC相關(guān)的HBV變異和STAT3基因多態(tài)性及其在HCC發(fā)生發(fā)展中的交互作用具有重要的價值。
　　 目的：探討HBV基因組EnhII/BCP/PC和preS區(qū)變異與慢性乙型肝炎(ChronichepatitisB，CHB)、肝硬化(Livercirrhosis，LC)、HCC的關(guān)系，以及STAT3多態(tài)性(rs4796793，rs2293152，rs1053004)與HCC易感性間的關(guān)系。分析HCC相關(guān)HBV變異

4、與STAT3基因多態(tài)性在乙肝陽性HCC發(fā)生發(fā)展中的交互作用，在群體水平揭示HCC的病毒和遺傳危險因素，為進(jìn)一步研究其相互作用機(jī)制提供線索，并為HCC的病因預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　 方法：以1012例健康對照、990例非肝癌HBV感染者(316例ASCs、316例CHB、358例LC)及1021例HCC為研究對象，采用多重PCR法鑒定ASCs、CHB、LC、HCC樣木的HBV基因型。使用巢式PCR法對四組樣本HBV基因組EnhII

5、/BCP/PC和preS區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，并對產(chǎn)物進(jìn)行測序，用MEGA5.0和Bioedit7.0進(jìn)行序列分析比對，檢測各位點(diǎn)突變情況。利用熒光探針實時定量PCR法檢測五組樣本的STAT3基因多態(tài)性(rs4796793，rs2293152，rs1053004)。Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗在Internet上進(jìn)行(http://ihg.gsf.de/ihg/snps.html)。使用SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入與分析，應(yīng)用t檢驗、

6、方差分析、χ2檢驗和非條件Logistic回歸模型分析HBV變異、STAT3多態(tài)性與HCC的關(guān)系及其在HCC發(fā)生發(fā)展中的相乘交互作用。
　　 結(jié)果：共有252例ASCs、172例CHB、224例LC、512例HCC樣本獲得EnhII/BCP/PC區(qū)序列。共有130例ASCs、164例CHB、194例LC和460例HCC樣本獲得preS區(qū)基因序列。
　　 1.HBV基因組EnhII/BCP/PC和preS區(qū)變異“熱點(diǎn)”：<

7、br>　　 EnhII/BCP/PC區(qū)的nt.1652、nt.1653、nt.1673、nt.1674、nt.1719、nt.1726、nt.1727、nt.1730、nt.1753、nt.1762、nt.1764、nt.1799、nt.1846、nt.1896共14個位點(diǎn)，preS區(qū)的preSdeletion、preS2startcodon、nt.2857、nt.2875、nt.2931、nt.2946、nt.2964、nt.302

8、6、nt.3051、nt.3054、nt.3060、nt.3063、nt.3066、nt.3069、nt.3116、nt.3120、nt.3186、nt.3191、nt.1、nt.7、nt.10、nt.31、nt.49、nt.52、nt.53、nt.76、nt.105、nt.109、nt.135及nt.147共30個位點(diǎn)在HBVB或C型樣本中變異頻率≥20％，作為本次研究的變異“熱點(diǎn)”。
　　 2.EnhII/BCP/PC和pr

9、eS區(qū)變異與CHB、LC、HCC的關(guān)系：
　　 (1)以ASCs作為對照，經(jīng)年齡和性別校正后，在基因型B中，A1762m、G1764m及preS2區(qū)12個位點(diǎn)的變異均能增加患CHB、LC、HCC的風(fēng)險。在基因型C中，G1719m、A1762m、G1764m、A1846m、G1896m、A1m、C7m、C10m、A31m、T49m、A52m、G105m、C109m、A135m、G147m及preS2startcodon變異增加患C

10、HB、LC、HCC的風(fēng)險，而A1652m、C1673m、C3051m、C3063m則能降低ASCs發(fā)展為CHB、LC、HCC的風(fēng)險。
　　 (2)以CHB作為對照，經(jīng)年齡和性別校正后，C1673m、A1726m、A1727m、C1730m、G1764m、C1799m、T2857m在C基因型中增加慢性乙肝患者進(jìn)展為肝硬化的風(fēng)險。在B基因型中，C3051m、C76m、preS2startcodon變異降低CHB發(fā)展至LC的風(fēng)險。

11、r>　　 (3)以CHB作為對照，經(jīng)年齡和性別校正后，在C型HBV感染者中，C1653m、T1674m、G1719m，T1753m，A1762m，G1764m，preSdeletion，T2857m、C2875m、C2931m、A3120m、A3186m、G3191m、T53m能增加CHB進(jìn)展為HCC的風(fēng)險。而nt1726變異在基因型B和C中都降低患HCC的風(fēng)險。
　　 (4)以LC作為對照，經(jīng)年齡和性別校正后，在C型中，C1

12、653m、T1674m、G1719m、T1753m、A1762m、C2875m、C3026m、A3120m、C76m與LC進(jìn)展為HCC的危險性顯著相關(guān)。在B和C型中，nt.1673、nt.1726、nt.1727、nt.1730四個位點(diǎn)的變異均能降低LC進(jìn)展至HCC的風(fēng)險。
　　 (5)以ASCs和CHB作為對照分析HBV變異與LC的關(guān)系：發(fā)現(xiàn)經(jīng)年齡和性別校正后，在B和C型中，nt.1652、nt.1719、nt.1726、nt

13、.1727、nt.1764、nt.1896及preS2區(qū)除preS2startcodon、nt.53、nt.76外所有位點(diǎn)變異均是LC的危險因素。
　　 (6)以ASCs、CHB、LC作為對照(non-HCC)分析HBV變異與HCC發(fā)生的關(guān)系：經(jīng)年齡和性別校正后，在C型中，C1653m、T1674m、G1719m、T1753m、A1762m、G1764m、A1846m、G1896m、preSdeletion、T2857m、C28

14、75m、C3026m、A3186m顯著增加患HCC的風(fēng)險。除preS2startcodon、nt.7、nt.53外，preS2區(qū)其他位點(diǎn)上的變異在B和C基因型中均增加HCC的發(fā)生風(fēng)險，而nt.1652、nt.1673、nt.1726、nt.1730、nt.1799五個位點(diǎn)上的變異均降低患HCC的風(fēng)險。
　　 (7)在HBeAg陰性狀態(tài)下，在HBVC型中，nt.1653、nt.1719、nt.1762的變異增加LC進(jìn)展為HCC的風(fēng)

15、險。而nt.1652、nt.1673、nt.1726、nt.1730的變異降低患HCC的風(fēng)險。HBeAg陰性HCC在nt.1653、nt.1674、nt.1846、nt.1896四個位點(diǎn)的變異頻率顯著高于HBeAg陽性HCC(P=0.000)。
　　 3.HBV變異與HCC和LC相關(guān)性的多因素分析
　　 (1)非條件Logistic回歸分析顯示，除年齡、性別、HBeAg陰性、基因型C外，EnhII/BCP/PC區(qū)的T16

16、74C/G(AOR=2.03，95％CI=1.34-3.07)、A1762T/G1764A(AOR=2.74，95％CI=1.91-3.94)、G1896A(AOR=2.05，95％CI=1.44-2.92)及preS區(qū)的preSdeletion(AOR=1.82，95％CI=1.14-2.91)、preS2startcodon變異(AOR=1.99，95％CI=1.20-3.30)、C2875A(AOR=1.98，95％CI=1.17

17、-3.36)、C7A(AOR=4.96，95％CI=2.78-8.84)、C76A(AOR=11.40,95％CI=4.80-27.06)是HCC的獨(dú)立危險因素。
　　 (2)應(yīng)用相同的非條件Logistic回歸模型對LC的危險因素進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)除年齡外，EnhII/BCP/PC區(qū)的A1762T/G1764A(AOR=2.37，95％CI=1.44-3.91)、G1896A(OR=2.75，95％CI=1.64-4.60)及pr

18、eS區(qū)的preSdeletion(AOR=4.96，95％CI=2.20-11.19)、T2857C(AOR=6.98，95％CI=2.47-19.72)、T3026C(AOR=2.15，95％CI=1.12-4.11)是LC的獨(dú)立危險因素。
　　 4.STAT3基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌易感性間的關(guān)系
　　 (1)與健康對照組比較，攜帶rs2293152GG基因型顯著增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(OR=1.30,95％CI=1.02

19、-1.66)。與健康對照組比較，攜帶rs1053004CT基因型或C等位基因(CT+CC)顯著增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(OR=1.26，95％CI=1.04-1.53；OR=1.22，95％CI=1.02-1.45)，同時也顯著增加患非肝癌HBV相關(guān)肝臟疾病的風(fēng)險(OR=1.33，95％CI=1.10-1.61；OR=1.26，95％CI=1.05-1.51)。
　　 (2)按性別進(jìn)行分層以后，在男性中，與健康對照組比較，攜帶rs4

20、796793GG基因型顯著增加患HCC和非肝癌HBV相關(guān)肝臟疾病的風(fēng)險(OR=1.38，95％CI=1.01-1.88；OR=1.40.95％CI=1.00-1.95)。與健康對照組比較，攜帶rs1053004CT基因型或C等位基因(CT+CC)顯著增加男性患HCC的風(fēng)險(OR=1.27，95％CI=1.03-1.57；OR=1.27.95％CI=1.04-1.55)，同時也顯著增加患非肝癌HBV相關(guān)肝臟疾病的風(fēng)險(OR=1.33，95

21、％CI=1.07-1.68；OR=1.29，95％CI=1.05-1.60)。
　　 在女性中，與健康對照比較，攜帶rs2293152GG基因型增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(OR=2.43，95％CI=1.38-4.29)，與非肝癌HBV感染者比較，攜帶rs2293152GG基因型也增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(OR=1.92，95％CI=1.12-3.31)。與健康對照組比較，攜帶rs1053004CC基因型降低女性HCC的發(fā)病風(fēng)險(OR=0

22、.48，95％CI=0.23-0.97)。但是由于女性HCC病例少，此結(jié)果還需在大樣本中進(jìn)行驗證。
　　 (3)按HBV基因型進(jìn)行分層以后，在C型樣本中，以rs2293152CC基因型作為對照，與非肝癌HBV感染者比較，攜帶GG基因型增加HCC的發(fā)病風(fēng)險(OR=1.67，95％CI=1.17-2.36)。
　　 5.STAT3基因多態(tài)性與乙肝病毒變異及基因型的交互作用
　　 (1)rs2293152多態(tài)性與Enh

23、ancerII/BCP/PC區(qū)HBV變異交互作用：經(jīng)年齡、性別等因素校正后，分別以rs2293152CC及T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A的野生型作為對照，發(fā)現(xiàn)rs2293152GG分別與C/G1674、T1762/A1764、A1896變異同時作用在C型HBV感染者中顯著增加HCC發(fā)病風(fēng)險(OR=3.27，95％CI=1.26-8.44；OR=7.61，95％CI=3.02-19.13；OR=4.63，95％

24、CI=2.01-10.66)，但是rs2293152多態(tài)性與T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A之間不存在交互作用。
　　 (2)rs1053004多態(tài)性與EnhancerII/BCP/PC區(qū)HBV變異交互作用：經(jīng)年齡和HBV基因型校正后，分別以rs1053004TT與T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A野生型作為對照，發(fā)現(xiàn)rs1053004CT分別與C/G1674、T1762/A17

25、64變異同時作用在男性中顯著增加HCC發(fā)病風(fēng)險(OR=2.17，95％CI=1.17-4.03；OR=2.91，95％CI=1.67-5.06)，且rs1053004多態(tài)性與T1674C/G在HCC發(fā)生發(fā)展中具有相乘交互作用(OR=2.53，95％CI=1.10-5.78)。在女性中，rs1053004CT分別與C/G1674、T1762/A1764、A1896變異同時作用顯著增加HCC發(fā)病風(fēng)險(OR=2.97，95％CI=1.06-8

26、.33；OR=4.54，95％CI=1.76-11.72；OR=2.79.95％CI=1.21-6.43)，但是不存在交互作用。
　　 (3)HBV基因型與STAT3基因多態(tài)性在HCC發(fā)生發(fā)展中的交互作用
　　 以HBV基因型B和rs4796793CC作為對照，經(jīng)年齡、性別和HBeAg狀態(tài)校正后，HBVC型與rs4796793GG共同作用顯著增加HCC風(fēng)險(OR=1.77，95％CI=1.04-3.01)；以基因型B和r

27、s2293152CC作為對照，HBVC型與rs2293152GG共同作用顯著增加HCC風(fēng)險(OR=3.22，95％CI=1.79-5.81)；以基因型B和rs1053004TT作為對照，HBVC型與rs1053004CT共同作用顯著增加HCC風(fēng)險(OR=1.79，95％CI=1.14-2.82)。但是，HBV基因型與rs4796793、rs2293152、rs1053004之間不存在相乘交互作用。
　　 結(jié)論：
　　 1

28、.年齡、男性、HBV基因型C、HBeAg陰性、T1674C/G、A1762T/G1764A、G1896A、preSdeletion、preS2startcodon變異、C2875A、C7A、C76A是HBV相關(guān)HCC的獨(dú)立危險因素。
　　 2.年齡、A1762T/G1764A、G1896A、preSdeletion、T2857C、T3026C是LC的獨(dú)立危險因素。
　　 3.攜帶rs2293152GG基因型增加HCC患病

29、風(fēng)險，rs1053004CT基因型或C等位基因與HBV慢性感染相關(guān)。在男性中，STAT3-1697GG基因型及rs1053004CT基因型或C等位基因與HBV慢性感染相關(guān)；在女性中，攜帶rs2293152GG基因型增加HBV慢性感染及感染后致HCC的風(fēng)險，但是需要更大樣本量驗證。
　　 4.rs2293152GG基因型增加C型HBV感染者發(fā)生HCC的風(fēng)險。
　　 5.T1674C/G變異與rs1053004多態(tài)性在男性H