丹參酮ⅡA多劑型的體內篩選和體外代謝研究.pdf

1、目的: 本研究旨在通過建立LC-MS/MS方法對丹參中的一個單體成分——丹參酮ⅡA——采用制劑新技術獲得的多個劑型進行生物利用度比較研究，期望獲得高生物利用度的新劑型，并對其進行體外代謝研究，對代謝產物進行結構解析，期望獲得活性代謝產物，預測藥物相互作用，提高臨床用藥的安全性。 方法: （1）建立LC-MS/MS方法，采用4*4交叉試驗設計，減少實驗誤差，采用比格犬作為實驗動物，分別對粉末、口服液、膠囊、注射劑等

2、劑型進行生物利用度比較研究。（2）用SD大鼠混合肝微粒體P450單一酶對丹參酮ⅡA進行了代謝穩(wěn)定性研究，采用96孔板進行反應和孵育、叔丁基甲醚萃取和96孔板離心的樣品處理方法、LC-MS/MS檢測等手段，得到了丹參酮ⅡA新劑型在體外被肝微粒體代謝的消除半衰期、清除率等信息。（3）采用NADPH、FMO抑制劑、P450各亞型抑制劑等方法，采用乙腈沉淀蛋白的樣品處理方法進行了代謝表型研究（4）采用平衡透析的方法，對丹參酮37℃進行孵育18h

3、后，利用LC-MS液質聯(lián)用儀進行了血漿蛋白結合率的研究（5）采用LC-MSn離子阱技術，對丹參酮ⅡA的多級質譜進行研究，對其結構斷裂途徑進行推測，利用SD大鼠肝微粒體孵育方式，對丹參酮ⅡA在體外的生物轉化進行了研究。（6）實驗數(shù)據分別采用統(tǒng)計矩法、DAS、3P97、winnonlon軟件對比進行了藥代參數(shù)的計算，最終采用統(tǒng)計矩法分析，統(tǒng)計分析采用SAS8．2統(tǒng)計軟件。 結果: 四次給藥后，超微粉懸液組、口服液組、丹參酮膠

4、囊組（4mg·kg－1）的藥物生物利用度F依次為5．4±0．61%，7．3±0．87%，5．6±1．5%，經過統(tǒng)計分析，兩兩之間沒有統(tǒng)計學差異，但口服液組的的生物利用度要高于其他兩組；代謝穩(wěn)定性：t1/2體外代謝穩(wěn)定，與其在比格犬血漿中的半衰期較長一致，清除率相關性較好；代謝表型研究發(fā)現(xiàn)有TS代謝途徑主要有CYP3A2、CYP2E1、CYP2C11、CYP2D1幾種方式；TS血漿蛋白結合率均較高，大予95%。且該藥的結合率與藥物濃度無關