基于毛狀根系統(tǒng)的丹參酮代謝調(diào)控相關(guān)基因功能研究.pdf

1、丹參Salvia miltiorrhiza Bunge，為唇形科鼠尾草屬（Lamiaceae Salvia Linn）多年生草本植物，常以其干燥的根或根莖入藥?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，丹參在心腦血管疾病治療中具有重要作用，并廣泛應(yīng)用于此類疾病的臨床治療。然而，丹參中的主要生物活性成分含量較低，長期以來，國內(nèi)對野生丹參的大肆采挖和粗放的大田種植模式，致使良品丹參日漸稀少，丹參中藥材質(zhì)量、產(chǎn)量都面臨重大考驗。因此，運用基因工程技術(shù)手段改良丹參品質(zhì)

2、日漸受到關(guān)注。
　　目前，丹參基因組和轉(zhuǎn)錄組的研究工作的不斷深入，對丹參中主要活性成分丹參酮和丹參酚酸的生物合成代謝途徑的認識也逐漸明確。其中，丹參酮合成代謝上游合成代謝的兩條代謝通路——MVA途徑和 MEP途徑以及相關(guān)代謝關(guān)鍵酶基因均已被挖掘；應(yīng)用基因工程技術(shù)手段調(diào)控丹參酮生物合成途徑并獲得高產(chǎn)丹參酮材料的的條件日趨成熟。
　　本研究根據(jù)丹參酮代謝關(guān)鍵酶基因序列信息，設(shè)計目標(biāo)位點特異性擴增引物，分離并擴增丹參SmCPS、S

3、mKSL、SmGPPS、SmFPPS等丹參酮合成代謝調(diào)控基因元件。針對SmCPS、SmKSL基因，應(yīng)用基因疊加技術(shù)構(gòu)建SmCPS、SmKSL多基因共表達載體，并通過根癌農(nóng)桿菌C58C1轉(zhuǎn)入丹參，獲得SmCPS、SmKSL共表達丹參毛狀根轉(zhuǎn)化材料。同時，針對SmGPPS、SmFPPS基因，同時構(gòu)建 SmGPPS、SmFPPS過表達載體及抑制表達載體（包括SmGPPS、SmFPPS共抑制表達載體），基于農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法，分別獲得Sm