歐洲越橘花色苷提取物抗氧化應(yīng)激作用及其機制學(xué)研究.pdf

1、實驗?zāi)康模罕緦嶒炓匝趸瘧?yīng)激(antioxidativestress)為實驗?zāi)Ｐ?，研究了歐洲越橘花色苷提取物對氧化應(yīng)激發(fā)生時機體內(nèi)抗氧化酶和抗氧化物的改變、線粒體功能以及線粒體膜電位變化的影響，探討歐洲越橘花色苷提取物抗氧化應(yīng)激可能的作用機制。 實驗方法：7周齡雄性昆明種小鼠用于本實驗，復(fù)制三種動物模型來評價歐洲越橘花色苷提取物的抗氧化應(yīng)激作用。 (1)采用HPLC-ESI-MS對歐洲越橘花色苷提取物(MyrtillusD

2、RYALC，EX，BatchN．28770/M1，購自IndenaS．p.A．(Milan，Italy))進(jìn)行了定性定量分析，并采用ORAC(Oxygenradicalabsorbancecapacity，抗氧化能力指數(shù))和DPPH(1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazy，1，1-二苯基苦基苯肼)兩種體外實驗方法評價了歐洲越橘花色苷提取物的體外抗氧化能力。 (2)通過常壓缺氧負(fù)荷小鼠模型觀察歐洲越橘花色苷提取物

3、對小鼠存活時間和耗氧量的影響，利用ORAC法測定血漿、大腦皮質(zhì)及肝組織勻漿中的抗氧化能力指數(shù)，Griess化學(xué)法測定NO含量，以及TBARS法測定血漿、大腦皮質(zhì)和肝組織勻漿中的丙二醛(MDA，malondialdehyde)含量。 (3)200mg·kg-1溴酸鉀腹腔注射誘導(dǎo)小鼠氧化應(yīng)激性腎損傷，采用分光光度法測定血清尿素氮(BUN，bloodureanitrogen)含量，HPLC測定小鼠血清中肌酐(Cr，creatinine

4、)含量，熒光酶標(biāo)儀測定小鼠腎組織的ORAC值，分光光度法測定小鼠腎組織中MDA和黃嘌呤氧化酶(XOD，Xethione)含量，Griess化學(xué)法測定腎組織的NO含量的變化。并觀察了歐洲越橘花色苷提取物給藥后各指標(biāo)的變化情況。 (4)18h拘束負(fù)荷后誘發(fā)小鼠應(yīng)激性肝損傷，分別用賴氏法測定小鼠血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性，硫代巴比妥酸法測定肝組織和血漿MDA水平，HPLC法測定谷胱甘肽(GSH，Glutathione)和維生素

5、C含量，比色法測定XOD活性，Griess化學(xué)法測定NO水平，熒光酶標(biāo)儀測定肝組織和血漿ORAC指數(shù)。 (5)利用生物化學(xué)和分子生物學(xué)方法，從線粒體功能角度解析歐洲越橘花色苷提取物抗氧化應(yīng)激作用的機制：利用紫外分光光度法檢測肝臟線粒體呼吸鏈復(fù)合酶活性、細(xì)胞色素a，b，c，c1含量和Na+-K+-ATPnase活性，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測肝線粒體膜電位水平，采用RT-PCR檢測肝臟SDHA-D和COⅪ-ⅢmRNA表達(dá)的變化。

6、實驗結(jié)果：(1)HPLC-ESI-MS分析結(jié)果顯示：歐洲越橘花色苷提取物含有15種花色苷，分別為Delphinidin(飛燕草花色素)、Cyanidin(矢本菊花色素)、Petunidin(牽牛花色素)、Peonidin(芍藥色素)和Malvidin(錦葵花色素)的3-O-葡萄糖苷、阿拉伯糖苷和半乳糖苷?？偦ㄉ盏暮繛?2.04％(相當(dāng)于cyanidin-3-glucoside)。 (2)DPPH和ORAC兩種體外抗氧化實驗結(jié)

7、果表明我們實驗中所用的歐洲越橘花色苷提取物在體外有很好的抗氧化能力，特別是ORAC實驗中，歐洲越橘花色苷提取物的體外抗氧化能力強于維生素C。 (3)歐洲越橘花色苷提取物對常壓缺氧負(fù)荷小鼠有一定的保護(hù)作用：明顯提高常壓缺氧小鼠的生存時間和對氧的利用能力，有效降低血漿、大腦皮質(zhì)和肝組織勻漿中的MDA含量，并調(diào)節(jié)血漿、大腦皮質(zhì)和肝組織中的NO含量。 (4)實驗證明200mg·kg-1KBrO3誘發(fā)小鼠氧化應(yīng)激性腎損傷：BUN和

8、血清肌酐含量顯著升高?？诜W洲越橘花色苷提取物能有效的改善BUN和肌酐含量，同時可以降低腎組織MDA、NO、XOD水平，提高腎組織的ORAC水平。因此，我們推測歐洲越橘花色苷提取物對氧化應(yīng)激性腎損傷的保護(hù)作用是通過降低機體內(nèi)的過氧化狀態(tài)實現(xiàn)的。 (5)拘束18h，小鼠血漿ALT活性顯著升高，結(jié)果提示拘束應(yīng)激可以造成嚴(yán)重的肝損傷。同時我們還觀察到血漿和肝組織內(nèi)的MDA水平升高、ORAC指數(shù)下降。給予歐洲越橘花色苷提取物可以明顯降低

9、拘束負(fù)荷誘發(fā)小鼠血漿ALT活性升高，清除體內(nèi)自由基，恢復(fù)肝組織GSH和vitaminC水平，降低肝組織過高的MDA和NO水平。 (6)歐洲越橘花色苷提取物通過清除體內(nèi)產(chǎn)生的過量活性氧自由基，改善拘束負(fù)荷小鼠肝組織線粒體呼吸鏈復(fù)合酶活性及其相關(guān)基因的表達(dá)，并改善線粒體膜電位和Na+-K+-ATPase活性。 實驗結(jié)論：歐洲越橘花色苷提取物可以改善氧化應(yīng)激對機體造成的損傷，其改善機制可能通過清除自由基、維持體內(nèi)抗氧化酶(劑)