抗癌新化合物鹽霉素對DU145荷瘤NOD-SCID小鼠腫瘤生長及其干細胞基因表達的影響.pdf

1、目的：觀察鹽霉素對DU145荷瘤NOD/SCID小鼠移植瘤生長的影響，探討鹽霉素體內(nèi)抑制腫瘤細胞增殖及其可能的機制。
　　方法：培養(yǎng)人前列腺癌DU145細胞至對數(shù)生長期，制備1×106/0.1ml單細胞懸液注射到60只NOD/SCID小鼠右前肢側腹部皮下，觀察成瘤情況。將成瘤后腫瘤大小基本一致的54只小鼠隨機分為6組：A組:陰性對照組；B：溶媒（二甲基亞砜溶液）處理組；C組:陽性對照組（紫杉醇10mg/Kg.d）；D組：鹽霉素2.

2、5mg/Kg.d；E組：鹽霉素5mg/Kg.d；F組：鹽霉素10mg/Kg.d；每組9只小鼠。給藥方式均為腹腔注射給藥，每日兩次。給藥28天后，處死小鼠。①測量各組移植瘤的大小及瘤重，計算抑瘤率。② HE染色后顯微鏡下觀察腫瘤細胞形態(tài)并行免疫組化檢測證實腫瘤來源。③用CD133、CD44抗體標記后采用流式細胞儀鑒定各實驗組腫瘤干細胞比例，分析鹽霉素對前列腺癌干細胞的作用效果。④采用microarray及RT-PCR技術定性、定量檢測各組

3、前列腺腫瘤干細胞的全基因表達譜，并采用Treeview軟件對各組基因進行差異性分析，篩選出與鹽霉素作用最具相關性的靶基因。
　　結果：①成瘤情況:接種60只小鼠，58只成瘤，成瘤率96.7％。②各組移植瘤體積、瘤重為：A880.12±168.59mm3、0.82±0.29g；B879.72±198.13mm3、0.81±0.36g；C151.48±83.34mm3、0.13±0.11g；D427.53±95.43mm3、0.39±

4、0.23g；E352.65±61.30mm3、0.35±0.15g；F292.01±61.50mm3、0.33±0.13g。陽性對照組及各鹽霉素作用組與陰性對照組間，陽性對照組及各鹽霉素作用組之間兩兩比較，差異都具有顯著性（P<0.05）。溶媒作用組與陰性對照組之間比較，差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。③病理及免疫組化檢測情況。HE染色顯微鏡下觀察：各鹽霉素作用組細胞數(shù)量減少、體積變小、胞質濃縮。免疫組化證實是來源于前列腺的腫瘤。

5、④流式細胞儀鑒定各組中腫瘤干細胞的比例為：A組1.62±0.37%，B組1.62±0.46%，C組1.62±0.35%，D組1.39±0.29%，E組1.13±0.28%，F(xiàn)組0.43±0.21%。各鹽霉素作用組與陰性對照組之間、各鹽霉素作用組之間比較，差異都具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且隨著鹽霉素濃度的增加，腫瘤干細胞的比例愈小；溶媒對照組與陰性對照組比較差異不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。⑤各鹽霉素作用組與陰性對照組腫瘤干細胞

6、全基因表達譜比較，各鹽霉素作用組表達均上調(diào)的基因有11個，表達均下調(diào)的基因有9個，其中ATP2A3基因的表達上調(diào)及PRKCG基因表達下調(diào)可能與鹽霉素抗腫瘤效應有關。
　　結論：①1×106/0.1mlDU145單細胞懸液在NOD/SCID小鼠的側腹部皮下種植有較好的成瘤性。②鹽霉素能有效抑制人前列腺癌DU145荷瘤NOD/SCID小鼠移植瘤生長，作用呈劑量依賴性。③鹽霉素對DU145荷瘤NOD/SCID免疫缺陷鼠的腫瘤干細胞有抑制