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1、目的:構(gòu)建表達(dá)SATB1基因的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-SATB1,研究其對(duì)人前列腺癌DU145細(xì)胞增殖和侵襲力的影響,為進(jìn)一步探討SATB1基因在前列腺癌發(fā)病機(jī)制中的作用及靶向SATB1基因治療前列腺癌奠定基礎(chǔ)。
方法:1.構(gòu)建質(zhì)粒pcDNA3.1-SATB1;
2.利用LipofectamineTM2000將pcDNA3.1-SATB1轉(zhuǎn)染人前列腺癌DU145細(xì)胞,以空質(zhì)粒pcDNA3.1及空白細(xì)胞作對(duì)照組;
2、r> 3.RT-PCR檢測(cè)DU145細(xì)胞SATB1基因mRNA表達(dá);
4.Western blot檢測(cè)DU145細(xì)胞中SATB1蛋白表達(dá);
5.CCK8檢測(cè)DU145細(xì)胞增殖情況;
6.Transwell檢測(cè)DU145細(xì)胞侵襲能力。
結(jié)果:1.瓊脂糖凝膠電泳及測(cè)序表明pcDNA3.1-SATB1質(zhì)粒構(gòu)建成功;
2.轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-SATB1基因12h、24h、36h后DU145細(xì)
3、胞SATB1mRNA表達(dá)水平為(170.3±2.1)%、(246.9±5.3)%、(304.5±9.9)%均顯著高于空質(zhì)粒pcDNA3.1組、空白細(xì)胞組(116.4±4.4、115.5±2.4)%(P<0.01);
3.轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-SATB1基因12h、24h、36h后DU145細(xì)胞SATB1蛋白表達(dá)水平為(34.3±0.6)%、(47.0±1.0)%、(61.5±1.2)%均顯著高于兩對(duì)照組(22.9±0.1)%、
4、(22.6±0.2)%(P<0.01);
4.轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-SATB1基因24h、48h、72h后DU145細(xì)胞增殖率分別為(25.3±2.6)%、(37.1±3.7)%、(64.6±2.9)%均顯著高于空質(zhì)粒對(duì)照組(10.7±1.2)%、(12.1±1.2)%、(13.3±1.1)%(P<0.05);
5.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-SATB1組侵襲細(xì)胞數(shù)為288.3±4.5,顯
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