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文檔簡介
1、目的:探討同時檢測艱難梭菌毒素A基因,毒素B基因和二元毒素基因的多重PCR方法,研究臨床分離的艱難梭菌的毒素基因類型。
方法:根據(jù)美國2010年艱難梭菌感染臨床實踐指南的標準,選取住院的腹瀉患者;收集2013年6月至2014年5月期間,北京協(xié)和醫(yī)院的160例住院腹瀉患者的糞便標本,用艱難梭菌選擇性培養(yǎng)基 CCFA分離培養(yǎng)艱難梭菌;用VITEK-MS質(zhì)譜儀進行菌種鑒定;采用酶免夾心與終點熒光檢測相結(jié)合技術(shù)(ELFA),檢測這些糞
2、便標本中艱難梭菌毒素A/B,并分析其毒素特征;將艱難梭菌純培養(yǎng)出的菌落用多重PCR方法測定艱難梭菌的毒素A基因、毒素B基因和二元毒素基因。
結(jié)果:收集的160例腹瀉患者糞便標本中,分離培養(yǎng)出37株艱難梭菌,細菌分離率達23.1%。33例糞便標本檢測艱難梭菌A/B毒素陽性,其中28例分離培養(yǎng)并鑒定出艱難梭菌;127例檢測艱難梭菌A/B陰性的糞便標本中,有9例分離培養(yǎng)并鑒定出艱難梭菌。應(yīng)用免疫學方法檢測毒素檢出率為75.68%(2
3、8/37)。用多重PCR方法,在37株分離的艱難梭菌中,36株檢出A/B毒素基因,檢出率為97.3%,基因呈2種分布類型:35株含 tcdA+,tcdB+,cdtA-?cdtB-;1株含tcdA+,tcdB+,cdtA+?cdtB+。
結(jié)論:本研究中分離的艱難梭菌多為產(chǎn)毒株;多重PCR方法可以快速地一步篩選艱難梭菌的毒素基因:毒素A基因,毒素B基因和二元毒素基因,毒素基因型主要是tcdA+,tcdB+,cdtA-?cdtB-,
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