應(yīng)用多重PCR方法鑒定糞樣和食品中產(chǎn)氣莢膜梭菌及腸毒素陽性產(chǎn)氣莢膜梭菌的基因型鑒定.pdf

1、產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種重要的人畜共患病的病原體,廣泛存在于環(huán)境中的土壤、水源、人和動物腸道中.該研究首先采集346份糞便樣品,按常規(guī)方法分離產(chǎn)氣莢膜梭菌,再用生化反應(yīng)試驗(yàn)和多重PCR方法鑒定了分離的產(chǎn)氣莢膜梭菌.該研究又從275份食品樣品中分離到97株產(chǎn)氣莢膜梭菌,檢出率為35.3％,其中以鮮蝦、鮮魚、鮮豬肉中的帶菌率最高,分別達(dá)到89.3％、44.4％和37.9％.所有分離到的產(chǎn)氣莢膜菌均為A型,未發(fā)現(xiàn)其它型的產(chǎn)氣莢膜梭菌.該研究再根據(jù)c

2、pe高度保守的開放閱讀框(Open Reading Frame,ORF)設(shè)計(jì)引物,以CPE陽性產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株為模板,擴(kuò)增出960bp的cpeORF;通過測序,與CPE陽性產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)株比較,發(fā)現(xiàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株的960bp的cpe的ORF基因序列沒有任何堿基突變,進(jìn)一步證實(shí)了cpe的ORF高度保守性.利用該多重PCR方法檢測4株CPE陽性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)株和兩株CPE陽性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株,其中2株致人食物中毒的CPE

3、陽性產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)株都檢出了染色體型cpe,而另外1株致人非食源性胃腸疾病標(biāo)準(zhǔn)株檢測到cpe-IS1470-like型質(zhì)粒cpe和1株致人抗生素相關(guān)性腹瀉標(biāo)準(zhǔn)株檢測到cpe-IS1151型質(zhì)粒cpe.因此該多重PCR方法可以快速區(qū)別引起人的胃腸疾病不同類型的CPE陽性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌.經(jīng)本多重PCR反應(yīng)鑒定證實(shí)分離到的兩株CPE陽性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌均為染色體CPE陽性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌.綜上所述,該研究應(yīng)用的產(chǎn)氣莢膜梭菌的多重PCR基因

4、分型方法是一種簡便、快速、準(zhǔn)確的基因分型方法,可以避免采用動物毒素中和試驗(yàn).并對采自糞便中和食品中的產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行分離與鑒定,初步摸清了中國的糞便中和食品中的產(chǎn)氣莢膜梭菌的類型.并在食品中發(fā)現(xiàn)了導(dǎo)致人食物中毒的CPE陽性A型產(chǎn)氣莢膜梭菌,為分子流行病學(xué)研究提供了重要理論依據(jù).此外該研究建立另一個多重PCR方法快速區(qū)分了攜帶染色體cpe和質(zhì)粒cpe的產(chǎn)氣莢膜梭菌,并證實(shí)了該次實(shí)驗(yàn)分離到的兩株CPE陽性產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株是染色體CPE陽性