A型產(chǎn)氣莢膜梭菌主要抗原蛋白篩選及其免疫保護(hù)作用.pdf

1、產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）最初是William Hery Welch發(fā)現(xiàn)的，因而又被命名為魏氏梭菌（Clostridium welchii），是一種G+厭氧芽孢桿菌。在繁殖過(guò)程中，C.perfringens能產(chǎn)生多種外毒素和酶，并且它們中的大部分都是具有致病作用的。其中Alpha毒素、Beta毒素、Epsilon毒素和Iota毒素是主要的致死毒素，根據(jù)這四種主要毒素可將C.perfringens分為A

2、-E5個(gè)類(lèi)型。其中A型C.perfringens可引起雞壞死性腸炎，該病對(duì)全球養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失，因而一直是研究的熱點(diǎn)。
　　從1891年C.perfringens被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，對(duì)其致病機(jī)理和有效預(yù)防措施的研究從未間斷，但仍缺乏細(xì)菌-宿主相互作用的信息和有效的疫苗來(lái)控制此菌的感染。本研究制備了C.perfringens標(biāo)準(zhǔn)株ATCC13124菌體蛋白樣品，通過(guò)雙向電泳對(duì)菌體蛋白進(jìn)行分離，并利用全菌多抗進(jìn)行雙向電泳的Wester

3、n-Blot檢測(cè)。經(jīng)過(guò)分析，本研究共選取了16個(gè)蛋白點(diǎn)，一式兩份進(jìn)行MALDI-TOF-MS和PMF分析，結(jié)果共有14種不同的蛋白被測(cè)出，除丙酮酸黃索氧還蛋白還原酶(PFO)與假定蛋白(HP)外，其他12種蛋白均為新鑒定出的免疫原性蛋白，大部分的免疫原性蛋白位于細(xì)胞質(zhì)中，其多具有參與細(xì)胞生長(zhǎng)與代謝的功能。
　　本研究選取了半胱氨酸合成酶(cysteine synthase，Cys)、假定轉(zhuǎn)酮酶(putativetransketol

4、ase，PTC)、乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，ADH)以及嘌呤核苷磷酸化酶(purinenucleoside phosphorylase，PNP)四種免疫原性蛋白，構(gòu)建其原核表達(dá)質(zhì)粒并進(jìn)行了蛋白表達(dá)，以純化蛋白為抗原制備了多抗，Western-Blot分析表明所制備的四種多克隆抗體均能特異性結(jié)合C.perfringens菌體蛋白，具有很好的反應(yīng)性。同時(shí)構(gòu)建了四種蛋白的真核表達(dá)質(zhì)粒，體外瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明四種蛋白