A型產氣莢膜梭菌主要抗原蛋白篩選及其免疫保護作用.pdf

1、產氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）最初是William Hery Welch發(fā)現(xiàn)的，因而又被命名為魏氏梭菌（Clostridium welchii），是一種G+厭氧芽孢桿菌。在繁殖過程中，C.perfringens能產生多種外毒素和酶，并且它們中的大部分都是具有致病作用的。其中Alpha毒素、Beta毒素、Epsilon毒素和Iota毒素是主要的致死毒素，根據(jù)這四種主要毒素可將C.perfringens分為A

2、-E5個類型。其中A型C.perfringens可引起雞壞死性腸炎，該病對全球養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經濟損失，因而一直是研究的熱點。
　　從1891年C.perfringens被發(fā)現(xiàn)以來，對其致病機理和有效預防措施的研究從未間斷，但仍缺乏細菌-宿主相互作用的信息和有效的疫苗來控制此菌的感染。本研究制備了C.perfringens標準株ATCC13124菌體蛋白樣品，通過雙向電泳對菌體蛋白進行分離，并利用全菌多抗進行雙向電泳的Wester

3、n-Blot檢測。經過分析，本研究共選取了16個蛋白點，一式兩份進行MALDI-TOF-MS和PMF分析，結果共有14種不同的蛋白被測出，除丙酮酸黃索氧還蛋白還原酶(PFO)與假定蛋白(HP)外，其他12種蛋白均為新鑒定出的免疫原性蛋白，大部分的免疫原性蛋白位于細胞質中，其多具有參與細胞生長與代謝的功能。
　　本研究選取了半胱氨酸合成酶(cysteine synthase，Cys)、假定轉酮酶(putativetransketol

4、ase，PTC)、乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase，ADH)以及嘌呤核苷磷酸化酶(purinenucleoside phosphorylase，PNP)四種免疫原性蛋白，構建其原核表達質粒并進行了蛋白表達，以純化蛋白為抗原制備了多抗，Western-Blot分析表明所制備的四種多克隆抗體均能特異性結合C.perfringens菌體蛋白，具有很好的反應性。同時構建了四種蛋白的真核表達質粒，體外瞬時轉染實驗表明四種蛋白