雌激素受體陰性(ER-)乳腺癌中miRNA調(diào)控PHGDH的相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　乳腺癌(Breast cancer)是女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，致死率較高，已成為嚴(yán)重威脅我國(guó)女性生命的嚴(yán)重疾病之一。隨著分子生物學(xué)的日益發(fā)展，靶向性治療受到越來(lái)越多的關(guān)注，尋找到與乳腺癌治療相關(guān)的調(diào)控基因變得尤為重要。磷酸甘油酸脫氫酶(phosphoglycerate dehydrogenase，PHGDH)是絲氨酸合成通路的第一個(gè)酶。研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞需要PHGDH保持增殖和存活，且在乳腺癌中有PHGDH過(guò)量表達(dá)。近幾

2、年對(duì)miRNAs的研究發(fā)現(xiàn)，不同的miRNAs在腫瘤中的作用也不同，它可分為癌基因或抑癌基因參與人體的一系列生命活動(dòng)，miRNAs對(duì)靶基因蛋白的調(diào)控成為研究熱點(diǎn)。
　　本課題以PHGDH為靶基因，預(yù)測(cè)針對(duì)靶基因3'UTR的miRNAs，選取6個(gè)可能相關(guān)的miRNAs進(jìn)行后續(xù)研究，分析是否存在miRNA調(diào)控靶基因PHGDH導(dǎo)致乳腺癌的發(fā)生，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行后續(xù)治療乳腺癌的可行性分析。
　　目的:
　　本研究旨在探討在雌激

3、素受體陰性乳腺癌中靶基因PHGDH的miRNA分子調(diào)控機(jī)制，分析通過(guò)miRNA調(diào)控PHGDH在乳腺癌細(xì)胞中的作用和治療的可行性。
　　方法:
　　①采用生物信息學(xué)工具預(yù)測(cè)能夠調(diào)控目的基因PHGDH的miRNAs;②qRT-PCR實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證MCF-7、T-47D、ZR-75-1和MDA-MB-231細(xì)胞中PHGDH mRNA和預(yù)測(cè)相關(guān)miRNAs的表達(dá)水平;③采用miRNA mimics上調(diào)MDA-MB-231細(xì)胞中miRN

4、A表達(dá)水平，通過(guò)qRT-PCR及Western-blotting方法驗(yàn)證靶基因PHGDH的表達(dá)水平;④采用雌二醇(E2)及他莫昔芬(TAM)結(jié)合miRNA mimics對(duì)上述細(xì)胞進(jìn)行處理，用CCK-8方法來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡或增殖情況。
　　結(jié)果:
　?、俪晒\(yùn)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)分析得到miR-27、miR-128、miR-137、miR-759、miR-1290及miR-4718等六個(gè)miRNAs具有調(diào)控PHGDH的可能;②

5、qRT-PCR結(jié)果顯示，在預(yù)測(cè)得到的6個(gè)miRNAs中，miR-128與PHGDH mRNA表達(dá)存在負(fù)相關(guān)關(guān)系;③通過(guò)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞系轉(zhuǎn)染miR-128 mimics，顯示上調(diào)miR-128能夠抑制PHGDH的表達(dá);④采用miRNA-128 mimics上調(diào)miR-128后能夠在雌二醇(E2)和他莫昔芬(TAM)干預(yù)情況下，MDA-MB-231細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線(xiàn)受到抑制。
　　結(jié)論:
　　1.上調(diào)miR-128能夠抑