C肽調(diào)控Ⅳ型膠原表達(dá)逆轉(zhuǎn)糖尿病腎病纖維化的分子機(jī)制.pdf

1、目的：
　　糖尿病(diabetes mellitus,DM)是繼腫瘤、心血管疾病之后第三大非傳染性慢性疾病，嚴(yán)重威脅著人類健康。目前，全球已有3.82億人患有DM，預(yù)計(jì)到2035年將達(dá)到5.92億。我國目前DM患者已經(jīng)達(dá)到9840萬，約占全球患病人數(shù)的四分之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，近三分之一的DM患者伴有糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)。DN是引起終末腎病的主要原因，也是DM患者的主要死亡原因。到目前為止，DN發(fā)

2、生的內(nèi)在機(jī)制尚未完全闡明，更無特效治療手段。因此，對(duì)DN發(fā)病及治療機(jī)制的研究迫切而意義重大。
　　DN時(shí)，腎小球基底膜增厚、系膜細(xì)胞分泌的細(xì)胞外基質(zhì)成分積聚，繼而引起腎小球硬化。DN時(shí)，腎小球系膜細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞外基質(zhì)主要是Ⅳ型膠原。Ⅳ型膠原分子有6條同源性α鏈：α1(Ⅳ)-α6(Ⅳ)，分別由不同基因編碼。DN纖維化的發(fā)生發(fā)展主要依靠轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor beta1, TGF-β1

3、)途徑所調(diào)節(jié)。TGF-β1主要通過轉(zhuǎn)錄因子Smad3傳遞信號(hào)，啟動(dòng)腎小球基質(zhì)的主要成份Ⅳ型膠原基因轉(zhuǎn)錄。我們的前期試驗(yàn)已證明，高糖刺激的早期反應(yīng)通過激活TGF-β1/Smad3信號(hào)通路，最終導(dǎo)致Ⅳ型膠原各α鏈基因的大量表達(dá)。
　　C肽由Steiner等人于20世紀(jì)60年代研究胰島素合成時(shí)首次被描述，主要在脊椎動(dòng)物胰腺的胰島β細(xì)胞中產(chǎn)生。它是連接胰島素原分子中胰島素A鏈與B鏈的一種連接肽。人C肽由31個(gè)氨基酸殘基組成，其分子量為30

4、20Da，等電點(diǎn)為3.0，半衰期為30min，主要經(jīng)腎臟代謝。正常人血清C肽的基礎(chǔ)水平約為0.4 nmol/L。近年來發(fā)現(xiàn)C肽有多種生物學(xué)作用，對(duì)DM并發(fā)癥，特別是DN有明顯治療作用。Sun等的研究表明，C肽可改善DM大鼠腎小球基底膜和系膜的擴(kuò)增。臨床上也發(fā)現(xiàn)Ⅰ型DM患者做胰腺移植或胰島素-C肽聯(lián)合應(yīng)用后，腎臟病變減輕。C肽作為內(nèi)源性因子，治療DN療效獨(dú)特，具有其它外源性藥物無可比擬的優(yōu)勢，更突顯了明確其作用機(jī)制的必要性和迫切性。

5、>　　DM時(shí)，Ⅳ型膠原積聚是DN的直接原因。而C肽能逆轉(zhuǎn)DN的腎臟病變，提示C肽作用機(jī)制與調(diào)控Ⅳ型膠原代謝緊密相關(guān)。雖有研究表明，在DM大鼠模型體內(nèi)，C肽能通過抑制DM大鼠腎小球系膜Ⅳ型膠原的形成來抑制其腎小球系膜擴(kuò)增，但其內(nèi)在分子機(jī)制尚不清楚。本研究旨在探討 C肽是否通過抑制 TGF-β1/Smad3信號(hào)通路抑制Ⅳ型膠原基因的表達(dá)，達(dá)到逆轉(zhuǎn)DN纖維化的功效。
　　本實(shí)驗(yàn)采用大鼠腎小球系膜細(xì)胞株HBZY-1，首先應(yīng)用不同高糖來尋找

6、模擬糖尿病高糖狀態(tài)的最佳高糖濃度；其次應(yīng)用該最佳高糖濃度作用不同時(shí)間來尋找高糖的最佳起效時(shí)間；然后應(yīng)用不同濃度C肽在同一高糖濃度及相同作用時(shí)間尋找C肽的有效濃度；用實(shí)時(shí)定量-PCR法(realtime-PCR)檢測α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)以及 TGF-β1 mRNA水平變化，同時(shí)利用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)來檢測細(xì)胞液中TGF-β1

7、蛋白水平變化。用免疫熒光染色法觀察Smad3核轉(zhuǎn)位；利用染色質(zhì)免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)技術(shù)，檢測Smad3與α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)啟動(dòng)子的相互作用。據(jù)此，探討C肽逆轉(zhuǎn)DN纖維化的主要分子機(jī)制，為治療DN提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)還采用健康雄性SD大鼠進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，用鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)造DM模型，C肽進(jìn)行干預(yù)治

8、療，實(shí)驗(yàn)前后測定血糖、體重變化，測定24小時(shí)尿蛋白含量，并取大鼠腎皮質(zhì)于光鏡及透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，旨在進(jìn)一步探討C肽逆轉(zhuǎn)DN的整體功效及作用。
　　方法：
　　1.細(xì)胞培養(yǎng)：大鼠腎小球系膜細(xì)胞株HBZY-1,購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)。HBZY-1細(xì)胞用含10％胎牛血清的DMEM低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)，0.25%胰蛋白酶消化傳代，接種于150ml培養(yǎng)瓶中，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。用C肽或亂碼C肽處理HB

9、ZY-1細(xì)胞，先用高糖DMEM培養(yǎng)24小時(shí)后，再換成C肽+高糖DMEM培養(yǎng)。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組：
　　2.1.探討不同糖濃度DMEM對(duì)HBZY-1中α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)和TGF-β1基因表達(dá)以及細(xì)胞液中TGF-β1的蛋白含量的影響
　　用不同糖濃度DMEM培養(yǎng) HBZY-124小時(shí)，根據(jù)不同糖濃度的DMEM分為6組：Con組(正常對(duì)照，細(xì)胞用低糖-DMEM培養(yǎng))、20mM

10、組(細(xì)胞用含20mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng))、25mM組(細(xì)胞用含25mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng))、30mM組(細(xì)胞用含30mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng))、35mM組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng))以及40mM組(細(xì)胞用含40mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng))。
　　2.2.探討35mmol/L高糖DMEM對(duì)HBZY-1細(xì)胞中α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)和TG

11、F-β1基因表達(dá)以及細(xì)胞液中TGF-β1的蛋白含量的影響
　　用35mmol/L高糖DMEM培養(yǎng)HBZY-1細(xì)胞，根據(jù)高糖作用時(shí)間不同分為4組：Con組(正常對(duì)照，細(xì)胞用低糖-DMEM培養(yǎng))、3h組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng)3小時(shí))、6h組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng)6小時(shí))、12h組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng)12小時(shí))。
　　2.3.探討不同濃度C肽對(duì)HBZY

12、-1細(xì)胞中α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)和TGF-β1 mRNA表達(dá)以及細(xì)胞液中TGF-β1的蛋白含量的影響
　　根據(jù)C肽濃度不同分為6組：Con組(正常對(duì)照，細(xì)胞用低糖-DMEM培養(yǎng))、OC組(高滲對(duì)照組，細(xì)胞用含35mmol/L L構(gòu)型葡萄糖-DMEM培養(yǎng))、HG組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng))、CP1組(0.1nmol/LC肽+35mmol/L高糖組)、CP5組(0.5nmol

13、/LC肽+35mmol/L高糖組)和CP9組(0.9nmol/LC肽+35mmol/L高糖組)。
　　2.4.探討HBZY-1細(xì)胞中Smad3的核轉(zhuǎn)位情況
　　根據(jù)培養(yǎng)條件不同分為7組：Con組(正常對(duì)照，細(xì)胞用低糖-DMEM培養(yǎng))、HG1組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng)1小時(shí))、HG2組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng)2小時(shí))、HG3組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng)3小時(shí)

14、)、CP1組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM+0.5nmol/LC肽培養(yǎng)1小時(shí))、CP2組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM+0.5nmol/LC肽培養(yǎng)2小時(shí))和 CP3組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM+0.5nmol/LC肽培養(yǎng)3小時(shí))。
　　2.5.探討轉(zhuǎn)錄因子Smad3與α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)或α5(Ⅳ)啟動(dòng)子的相互作用
　　實(shí)驗(yàn)分成5組：Con組(正常對(duì)照，

15、細(xì)胞用低糖-DMEM培養(yǎng))、OC組(高滲對(duì)照組，細(xì)胞用含35mmol/L L構(gòu)型葡萄糖-DMEM培養(yǎng))、HG組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM培養(yǎng))、CP組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM+0.5nmol/LC肽培養(yǎng))、ScCP組(細(xì)胞用含35mmol/L的葡萄糖-DMEM+0.5nmol/L亂碼C肽培養(yǎng))。
　　3.HBZY-1細(xì)胞中α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)和TGF-β1

16、 mRNA表達(dá)水平的檢測
　　Trizol一步法分別提取HBZY-1細(xì)胞中總RNA；用β-actin做內(nèi)參，real-time PCR方法檢測α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)及TGF-β1的mRNA表達(dá)。
　　4.利用免疫熒光法，檢測HBZY-1細(xì)胞中Smad3的核轉(zhuǎn)位情況
　　5.利用ChIP技術(shù)，檢測HBZY-1細(xì)胞中，Smad3與α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)或α5(Ⅳ)

17、啟動(dòng)子的相互作用
　　6.動(dòng)物分組與取材
　　健康雄性SD大鼠80只，隨機(jī)分為2組，正常組(Con)8只，其余72只腹腔注射STZ溶液(STZ溶于濃度為0.1 mol/L的檸檬酸納緩沖液，pH4.4，新鮮配制，終濃度為10 mg/mL，按45 mg/kg腹腔注射)制備DM模型。注射3天后，測空腹血糖高于16.7mmol/L，尿糖+++以上，為造模成功。造模成功68只，再將其隨機(jī)分成4組：病理組(DM,17只)，C肽防治組，C

18、肽治療組(CP,17只)，亂碼C肽治療組(ScCP,17只)。以上五組均20~25℃室溫下喂養(yǎng)。DP組每天兩次皮下注射C肽(130nmol/kg)，治療6周后停藥。CP組和ScCP組在病程6周后，分別開始每天兩次皮下注射人C肽或亂碼C肽(130nmol/kg)，治療6周。最后股動(dòng)脈放血處死。
　　6.1.檢測血糖和24小時(shí)尿白蛋白含量
　　取尾靜脈血，用血糖儀檢測并記錄注射STZ前、后第3天和第12周的血糖變化。收集24小時(shí)

19、尿液，檢測尿白蛋白含量。
　　6.2.形態(tài)學(xué)觀察
　　取腎皮質(zhì)作病理切片，分別于光鏡和透射電鏡下觀察。
　　結(jié)果：
　　1.realtime-PCR檢測不同糖濃度DMEM對(duì)HBZY-1中α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)和TGF-β1 mRNA表達(dá)
　　1.1.α1(Ⅳ) mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比20mM組(2.25±0.12,P<0.05)、25mM組(2.69±0.19,

20、 P<0.01)、30mM組(2.51±0.10,P<0.01)、35mM組(4.02±0.52,P<0.01)以及40mM組(3.20±0.36,P<0.01)均顯著升高。
　　1.2.α2(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比20mM組(2.98±0.22,P<0.01)、25mM組(2.57±0.38,P<0.05)、30mM組(2.57±0.30,P<0.05)、35mmol/L組(4.28±0.54,P<0.01)以及4

21、0mM組(2.40±0.32, P<0.05)均顯著升高。
　　1.3.α3(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比20mM組(2.42±0.10,P<0.05)、25mM組(2.54±0.29,P<0.01)、30mM組(2.58±0.27,P<0.01)、35mM組(3.84±0.32,P<0.01)以及40mM組(2.59±0.40,P<0.01)均顯著升高。
　　1.4.α4(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比20m

22、M組(3.33±0.16,P<0.01)、25mM組(3.39±0.25,P<0.01)、30mM組(3.32±0.44,P<0.01)、35mM組(4.68±0.44,P<0.01)以及40mM組(3.50±0.22,P<0.01)均顯著升高。
　　1.5.α5(Ⅳ) mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比20mM組(2.13±0.15,P<0.01)、25mM組(2.31±0.09,P<0.01)、30mM組(2.17±0.05,P

23、<0.01)、35mM組(3.39±0.05, P<0.01)以及40mM組(2.192±0.09, P<0.01)均顯著升高。
　　1.6.TGF-β1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比20mM組(3.10±0.29,P<0.01)、25mM組(3.14±0.14,P<0.01)、30mM組(2.78±0.32,P<0.01)、35mM組(3.76±0.27,P<0.01)以及40mM組(2.84±0.14,P<0.01)均顯著

24、升高。
　　2.realtime-PCR檢測不同時(shí)間點(diǎn)35mmol/L高糖DMEM對(duì)HBZY-1細(xì)胞中α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)和TGF-β1 mRNA表達(dá)的影響
　　2.1.α1(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比3h組(4.63±0.61,P<0.01)、6h組(2.48±0.26,P<0.05)、12h組(2.86±0.17,P<0.01)均顯著升高。
　　2.2.α2(Ⅳ)mR

25、NA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比3h組(2.97±0.05,P<0.05)、6h組(2.43±0.13, P<0.01)、12h組(2.66±0.12, P<0.01)均顯著升高。
　　2.3.α3(Ⅳ) mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比3h組(4.00±0.56,P<0.01)、6h組(3.05±0.49,P<0.01)、12h組(3.07±0.50,P<0.01)均顯著升高。
　　2.4.α4(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Co

26、n組比3h組(2.94±0.82,P<0.01)、6h組(2.13±0.07,P<0.01)、12h組(2.44±0.07, P<0.01)均顯著升高。
　　2.5.HBZY-1中α5(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比3h組(3.41±0.16,P<0.01)、6h組(2.40±0.11,P<0.01)、12h組(2.42±0.06,P<0.01)均顯著升高。
　　2.6.TGF-β1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比3

27、h組(4.00±0.56,P<0.01)、6h組(3.05±0.49, P<0.05)、12h組(3.07±0.50,P<0.05)均顯著升高。
　　3.realtime-PCR檢測不同濃度 C肽對(duì)HBZY-1細(xì)胞中α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)、α5(Ⅳ)和TGF-β1mRNA表達(dá)的影響
　　3.1.α1(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比OC組(1.16±0.11)、CP5組(1.18±0.16)無統(tǒng)計(jì)

28、學(xué)差異；而與Con組比HG組(3.59±0.57,P<0.01)、CP1組(3.59±0.57,P<0.01)、CP9組(3.82±0.55, P<0.01)均顯著升高。
　　3.2.α2(Ⅳ) mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比OC組(0.96±0.10)、CP5(0.92±0.12)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而與Con組比HG組(3.12±0.48,P<0.01)、CP1組(2.53±0.28,P<0.01)、CP9組(2.25±0.28,

29、 P<0.05)均顯著升高。
　　3.3.α3(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比OC組(0.85±0.07)、CP5組(1.04±0.13)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而與Con組比HG組(2.67±0.45,P<0.05)、CP1組(2.46±0.52,P<0.05)、CP9組(2.42±0.40,P<0.05)均顯著升高。3.4α4(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比OC組(1.10±0.12)、CP5組(1.12±0.10)無統(tǒng)計(jì)學(xué)

30、差異；而與Con組比HG組(2.18±0.18,P<0.01)、CP1組(2.22±0.15,P<0.01)、CP9組(2.26±0.15,P<0.01)均顯著升高。3.5α5(Ⅳ)mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比OC組(1.05±0.06)、CP5組(1.08±0.07)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而與Con組比HG組(2.30±0.07,P<0.01)、CP1組(1.71±0.05,P<0.01)、CP9組(2.04±0.11,P<0.01)均顯

31、著升高。3.6 TGF-β1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量與Con組比OC組(1.04±0.07)、CP5組(1.06±0.14)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而與Con組比HG組(2.90±0.09,P<0.01)、CP1組(2.04±0.13,P<0.01)、CP9組(2.21±0.21,P<0.01)均顯著升高。
　　4.ELISA檢測不同糖濃度DMEM對(duì)HBZY-1細(xì)胞液中TGF-β1蛋白含量的影響。與Con組(506.60±37.44 pg/m

32、l)比20mM組(485.55±12.49 pg/ml)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而25mM組(364.12±18.12 pg/ml,P<0.01)、30mM組(385.25±20.42 pg/ml,P<0.01)、35mM組(307.29±6.66 pg/ml,P<0.01)以及40mM組(352.22±14.98 pg/ml,P<0.01)均顯著降低。
　　5.ELISA檢測35mmol/L高糖DMEM，不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)HBZY-1細(xì)胞液中T

33、GF-β1蛋白含量的影響。與Con組(798.972±37.367pg/ml)比3h組(322.77±22.52 pg/ml,P<0.01)、6h組(447.69±47.68pg/ml,P<0.01)均顯著降低；而12h組(738.40±64.53 pg/ml)卻無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　6.ELISA檢測不同濃度C肽對(duì)細(xì)胞液中TGF-β1蛋白含量的影響。與Con組(1228.90±57.79 pg/ml)比OC組(1198.99±26

34、.14 pg/ml)、CP5組(1197.19±13.75 pg/ml)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而HG組(1036.07±55.64 pg/ml,P<0.05)、CP1組(1365.66±45.84 pg/ml, P<0.05)以及CP9組(1459.49±45.52 pg/ml,P<0.05)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　7.免疫熒光法檢測HBZY-1細(xì)胞核中Smad3的核轉(zhuǎn)位情況。正常組細(xì)胞在3h內(nèi)均未檢測到Smad3熒光；HG1組及HG2組檢

35、測到部分Smad3熒光；HG3組Smad3熒光強(qiáng)度最為顯著，Smad3蛋白幾乎全都進(jìn)核。CP1組和CP2組檢測到Smad3熒光；CP3組Smad3熒光最弱，Smad3蛋白幾乎都已出核。
　　8.ChIP技術(shù)檢測HBZY-1細(xì)胞內(nèi)Smad3與α1(Ⅳ)、α2(Ⅳ)、α3(Ⅳ)、α4(Ⅳ)或α5(Ⅳ)各啟動(dòng)子的相互作用的變化。
　　8.1.與Con組比Smad3與α1(Ⅳ)和α2(Ⅳ)啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合作用OC組(1.08±0.11

36、)、CP組(1.18±0.11)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而HG組(2.58±0.21,P<0.01)、ScCP組(2.04±0.12,P<0.01)均顯著升高。
　　8.2.與Con組比Smad3與α3(Ⅳ)及α4(Ⅳ)啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合作用OC組(1.16±0.06)、CP組(1.41±0.26)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而HG組(109.33±2.85,P<0.01)、ScCP組(66.09±6.51,P<0.01)均顯著升高。
　　8.3.

37、與Con組比Smad3與α5(Ⅳ)啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合作用OC組(1.23±0.17)、CP組(1.59±0.15)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；而HG組(13.08±0.83,P<0.05)、ScCP組(10.26±0.90,P<0.05)均顯著升高。
　　9.大鼠的一般表現(xiàn)以及C肽對(duì)DM大鼠血糖和體重的影響
　　造模成功的大鼠逐漸出現(xiàn)消瘦，皮毛無光澤、疏松，反應(yīng)遲鈍，多飲、多尿、多食、生長遲緩等癥狀。隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，DM組和ScCP組體征更加

38、明顯，而DP組和CP組明顯有好轉(zhuǎn)。
　　各組大鼠入選時(shí)血糖和體重?zé)o顯著性差異。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，DP組平均血糖(29.96±0.52 mmol/L)，CP組(28.9±0.74 mmol/L)，ScCP組(29.74±0.66 mmol/L)，均與DM組(29.23±0.66 mmol/L)無顯著性差異。以上四組均顯著高于Con組(6.4±0.25 mmol/L,P<0.01)。
　　藥物干預(yù)治療結(jié)束時(shí)，CP組體重(271.82±

39、8.76 g)，ScCP組(248.35±7.19 g)，DP組體重(368.06±10.09 g)，均與DM組(249.00±7.13 g)無顯著性差異。以上四組均顯著低于Con組(515.50±14.42 g,P<0.01)。
　　10.尿白蛋白含量的變化
　　整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，DP組(55.21±4.06 mg)及CP組(70.2±9.46 mg)平均24小時(shí)尿白蛋白含量均顯著低于DM組(327.93±32.58 mg, P

40、<0.05)；ScCP組(293.79±49.40 mg)平均24小時(shí)尿白蛋白含量與DM組無顯著性差異。以上四組均顯著高于Con組(15.42±4.06 mg, P<0.01)。
　　11.腎小球形態(tài)學(xué)觀察
　　腎小球光鏡(×400)下觀察：Con組腎小球未見異常；DM組，可見腎小球結(jié)構(gòu)異常、腎小囊腔增大；ScCP組與DM組相似，并且有腎小球壞死的現(xiàn)象；而DP組和CP組，可見腎小囊腔縮小，與DM組比有所改善，且DP組較CP組

41、的病理改變減輕。
　　腎小球透射電鏡(×20K)下觀察：Con腎小球未見異常。DM組，可見基底膜重度增厚，呈丘狀隆起，足突重度融合，血管內(nèi)皮細(xì)胞重度增生，窗孔加減少；ScCP組與DM組相似；DP組和CP組可見基底膜和血管內(nèi)皮細(xì)胞接近正常，足突部分輕度融合，與DM組比明顯改善，且DP組較CP組的病理改變減輕。
　　結(jié)論：
　　1.C肽調(diào)控Ⅳ型膠原表達(dá)逆轉(zhuǎn)糖尿病腎病纖維化的分子機(jī)制是：
　　(1)C肽可明顯抑制高糖(