豬苓液體發(fā)酵及其多糖活性的研究.pdf

1、目的:對(duì)豬苓進(jìn)行液體發(fā)酵研究,確定豬苓液體發(fā)酵的最適發(fā)酵培養(yǎng)基和最適培養(yǎng)條件;從發(fā)酵液中提取和分離豬苓多糖,并對(duì)豬苓胞外多糖進(jìn)行純化、體外抗氧化活性研究。
　　 方法:(1)應(yīng)用PDA培養(yǎng)基進(jìn)行試管斜面培養(yǎng),對(duì)7株來(lái)源不同的豬苓菌株進(jìn)行活化、復(fù)壯;
　　 (2)觀察記錄不同試管斜面培養(yǎng)基菌齡對(duì)發(fā)酵適應(yīng)期和對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的影響;測(cè)定發(fā)酵液的pH值、還原糖含量和菌絲體量,并繪制豬苓液體發(fā)酵生長(zhǎng)曲線;
　　 (3)對(duì)溫度、

2、轉(zhuǎn)速、接種量、裝液量、碳源種類、氮源種類、碳源濃度、氮源濃度分別進(jìn)行單因素分析,對(duì)常量元素和微量元素分別進(jìn)行L423和L934正交試驗(yàn)分析,優(yōu)化豬苓液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件;
　　 (4)對(duì)豬苓菌絲體超聲提取條件進(jìn)行優(yōu)化;采用水提醇沉方法分別對(duì)豬苓菌絲體多糖和子實(shí)體多糖提取率進(jìn)行比較;采用水提醇沉方法分別提取胞外水溶性多糖、胞內(nèi)水溶性多糖和胞內(nèi)堿溶性多糖:并用苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量;
　　 (5)進(jìn)行多糖基本理化性質(zhì)的

3、檢驗(yàn),并通過(guò)芬頓(Fenton)反應(yīng)、鄰苯三酚自氧化法、抑制H2O2誘導(dǎo)紅細(xì)胞氧化溶血、抑制肝組織脂質(zhì)過(guò)氧化等方法,測(cè)定豬苓多糖體外抗氧化活性。
　　 結(jié)果:(1)7株豬苓菌種都活化、復(fù)壯良好;其中10號(hào)菌株成活率高、生長(zhǎng)迅速,確定為下階段試驗(yàn)菌株。
　　 (2)確定了25日齡為最適固體斜面培養(yǎng)基菌齡,并繪制出了豬苓液體發(fā)酵生長(zhǎng)曲線。
　　 (3)單因素試驗(yàn)結(jié)果表明,豬苓發(fā)酵的最適培養(yǎng)條件為:溫度26℃、轉(zhuǎn)速13

4、0r/min、接種量10％、裝液量100mL/250mL;碳源為馬鈴薯淀粉,濃度4.0％,氮源酵母浸出汁,濃度2％;正交試驗(yàn)結(jié)果表明,常量元素MgSO4.7H2O1.0g、KH2PO42.0g、CaCl20.1g;微量元素ZnSO41.5mg、MnSO41.5mg、FeSO40.5mg、Vb12.0mg。
　　 (4)豬苓菌絲體最佳超聲提取條件為超聲頻率16kHz、液固比為20、破碎時(shí)間為30min;豬苓菌絲體多糖和予實(shí)體多糖提

5、取率分別為3.9％、1.7％:豬苓胞外水溶性多糖、胞內(nèi)水溶性多糖、胞內(nèi)堿溶性多糖提取率分別為6.3mg/mL、0.8mg/mL、1.7mg/mL。
　　 (5)基本理化性質(zhì)鑒定表明,所提豬苓多糖具有糖的基本性質(zhì)。體外抗氧化試驗(yàn)表明,豬苓胞外多糖具有較好的抗氧化作用。在多糖濃度為8.0mg/mL時(shí),其對(duì)羥自由基清除率達(dá)60.3％;在多糖濃度為6.0mg/mL時(shí),其超氧陰離子自由基清除率為49.8％;當(dāng)多糖濃度為3.0mg/mL,時(shí)