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文檔簡介
1、利用平板培養(yǎng)對多孔菌Y-30菌株進(jìn)行了菌絲體固體培養(yǎng)的營養(yǎng)條件和pH條件研究。經(jīng)過單因素篩選試驗(yàn),結(jié)果表明:菌絲體培養(yǎng)的最佳碳源為玉米面,最佳氮源為蛋白胨,最適pH為6;無機(jī)鹽試驗(yàn)中,加入KH2PO4時(shí),生長速度最快,其次為MgSO4,但同時(shí)加入二者的菌絲生長狀況最好;碳氮比為20/1和40/1時(shí)平均日生長速度相同,為防止菌絲過早老化,最終選擇碳氮比為20/1;確定最佳培養(yǎng)基配方,對玉米面、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀四個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)
2、,結(jié)果確定菌絲生長的最佳固體培養(yǎng)基配方為:玉米面3%,蛋白胨0.7%,磷酸二氫鉀0.1%,硫酸鎂0.05%、蒸餾水1000ml、瓊脂2%。
利用搖瓶培養(yǎng)對多孔菌Y-30菌株液體培養(yǎng)的營養(yǎng)條件進(jìn)行了研究。通過檢測培養(yǎng)過程中發(fā)酵液多糖、菌絲體多糖和菌絲體生物量三個(gè)指標(biāo),對液體培養(yǎng)的單因素進(jìn)行篩選試驗(yàn),結(jié)果表明,液體培養(yǎng)的最佳碳源為蔗糖,最佳氮源為牛肉膏,無機(jī)鹽篩選時(shí),MgSO4和KH2PO4在菌絲體生物量和多糖產(chǎn)量上都表現(xiàn)較好
3、,因此,兩種無機(jī)鹽同時(shí)加入。最佳C/N為40/1。經(jīng)過正交試驗(yàn),確定多孔菌Y-30菌株的最佳液體培養(yǎng)配方為:蔗糖3%、牛肉膏0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.03%、蒸餾水1000ml。
在初步確定液體培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配條件下,通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),研究了多孔菌Y-30菌株液態(tài)發(fā)酵工藝條件對多糖產(chǎn)量和菌絲體生物量的影響。單因素試驗(yàn)結(jié)果表明:最佳的液體種子種齡、起始pH、溫度、裝瓶量、接種量和轉(zhuǎn)速依次為,6d、自然
4、pH(6.7)、25℃、200ml、10%和180r/min。對pH、接種量和溫度三個(gè)因素進(jìn)行了正交試驗(yàn),結(jié)果顯示:以胞外多糖產(chǎn)量為依據(jù),最優(yōu)組合為pH6.7、接種量10%、溫度25℃;以胞內(nèi)多糖為依據(jù),最優(yōu)組合為pH6.3、接種量10%、溫度27℃。在胞外多糖產(chǎn)量依據(jù)的最優(yōu)組合下進(jìn)行了發(fā)酵試驗(yàn),并跟蹤檢測了發(fā)酵液pH、黏度、ECP、ICP和菌絲體生物量的變化。
采用熱水浸提法,通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),研究了提取溫度、時(shí)
5、間、料水比、提取液pH、提取次數(shù)、乙醇用量對菌絲體多糖得率的影響。單因素試驗(yàn)結(jié)果表明:菌絲體多糖提取的最佳溫度、時(shí)間、料水比、pH、提取次數(shù)和乙醇用量分別為,90℃、2.5h、1/30、11、2次和4倍體積;在固定pH11,提取次數(shù)2次的條件下,對提取溫度、時(shí)間和料水比三個(gè)因素的正交試驗(yàn),結(jié)果:提取的最佳組合為,提取溫度90℃、時(shí)間2h、料水比1/30,得到的菌絲體多糖含量為2.21mg/mg。
將分級得到的菌絲體多糖、發(fā)
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