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文檔簡介
1、從自然環(huán)境、人畜食品、健康動物胃腸道內容物等樣品中選育有益乳酸芽孢桿菌,并對其進行培養(yǎng)條件的優(yōu)化,為乳酸芽孢桿菌類微生態(tài)制劑的研發(fā)奠定基礎。 用添加溴甲酚紫指示劑的GYP平板從67樣品中分離出41株產(chǎn)酸芽孢桿菌,通過高效液相色譜檢測、抑菌試驗和芽孢形成數(shù)試驗,從中篩選出SC株、SL1株、TR株等三株性能優(yōu)良的產(chǎn)乳酸芽孢桿菌。通過Biolog微生物自動鑒定系統(tǒng)、16SrRNA堿基序列分析,對三株菌進行種屬關系的分析鑒定。鑒定結果是
2、:SC株株為乳酸芽孢桿菌SC(暫命名),TR株為乳酸芽孢桿菌TR(暫命名),SL1株為蠟狀芽孢桿菌。 選用乳酸芽孢桿菌SC作為出發(fā)菌株,以紫外線、亞硝基胍作誘變物,以不同的濃度和作用時間對SC株進行復合誘變;誘變培養(yǎng)后,挑選出200株誘變株,比較它們的產(chǎn)酸、抑菌活性和芽孢形成率等三方面的性能,最終篩選得到一株芽孢形成率符合要求,產(chǎn)酸能力和抑菌活性均有提高的正向突變株,即乳酸芽孢桿菌SC27株。用SC27株培養(yǎng)物對5組昆明系SPF
3、小鼠進行急性毒性試驗,將培養(yǎng)物按10、5、2.5、1.25、0.625g/kg五種劑量分別給小鼠灌胃染毒,并記錄每天情況。整個試驗過程中無小鼠死亡,小鼠亦無病理解剖學變化。 穩(wěn)定性試驗的結果表明,SC27株具有較好的熱穩(wěn)定性,在濕熱處理中,當溫度達到100℃、作用時間在20min以上時,活菌數(shù)才下降一個數(shù)量級。在干熱處理中,在80℃、40min和100℃、60min的時候顯示該活菌數(shù)為零,而其它不同溫度和不同處理時間均不能使該活
4、菌數(shù)下降一個數(shù)量級;同時,SC27株對pH值2.2~7.0具有很好的耐受性,說明具有較強的耐酸性;但該菌株對多數(shù)抗生素較為敏感。 通過乳酸芽孢桿菌SC27的體外抑菌試驗,表明該菌的培養(yǎng)物對金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏桿菌等五種革蘭氏陽性、陰性指示菌有明顯的抑制作用;另外,試驗結果顯示SC27株培養(yǎng)物的抑菌物質具有較好的熱穩(wěn)定性,受木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶的影響較小。 在培養(yǎng)條件的探索上,以pH值、芽孢產(chǎn)生總數(shù)、芽孢形
5、成率作參考指標并考慮培養(yǎng)基成本的問題,比較篩選出適宜該菌生長的碳源、氮源,在此基礎上進一步考慮添加對乳酸和芽孢形成有利的金屬離子,利用正交試驗設計,對SC27株進行培養(yǎng)條件的優(yōu)化。最終得出培養(yǎng)基的優(yōu)化組合是:黃豆汁0.5%、甘蔗汁13%、K2HPO40.05‰、MgSO40.05‰、MnSO40.02‰;其培養(yǎng)條件的優(yōu)化組合是:發(fā)酵溫度為37℃;接種量為10%;裝液量為40mL/250mL;先搖床120r/min培養(yǎng)24h,再轉入靜置培
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