復(fù)合誘變選育富鉻酵母及其培養(yǎng)條件優(yōu)化研究.pdf

1、鉻是生物體必需的微量元素，具有很多生物學(xué)功能。GTF(葡萄糖耐量因子)是一種能維持動(dòng)物血液中葡萄糖水平正常的物質(zhì)，鉻是保持GTF活性的必要成分。但是無機(jī)鉻的吸收率底、毒性大。酵母菌對(duì)微量元素具有很強(qiáng)的吸附作用，可以作為微量元素良好的載體，將無機(jī)鉻轉(zhuǎn)化成有機(jī)鉻，提高鉻在機(jī)體內(nèi)吸收利用率，降低其毒副作用，且酵母本身含豐富的蛋白質(zhì)和B族維生素，是一種良好的微生物蛋白飼料營(yíng)養(yǎng)源。所以，獲得高產(chǎn)富鉻酵母的關(guān)鍵就在于擁有一株好菌株。本實(shí)驗(yàn)就是經(jīng)N+

2、注入并輔以紫外線復(fù)合誘變處理，篩選高產(chǎn)突變株，并確定制備富鉻酵母的最佳條件。 實(shí)驗(yàn)以熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)1254為出發(fā)菌，低能離子束誘變參數(shù)是能量20Kev，劑量0～20×2.6×1014N+/cm2，結(jié)合鉻濃度剃度平板篩選法，得到耐鉻能力較強(qiáng)的菌株Y-6。結(jié)果顯示：生物量和鉻含量分別由原來的0.525ug/100mL、562ug/g提高到0.905ug/100mL、829ug/g。變異菌株Y-6經(jīng)

3、傳5代培養(yǎng)，生產(chǎn)性能穩(wěn)定。利用單因素試驗(yàn)摸索出了Y-6最佳培養(yǎng)條件：最佳培養(yǎng)基為：1％酵母粉、1％蛋白陳、2％麥芽糖、蒸餾水配制，培養(yǎng)基含鉻量800ug/mL、初始pH5.0、10％接種量、培養(yǎng)溫度30℃、培養(yǎng)24h，制備富鉻酵母效果最佳，此項(xiàng)富鉻酵母制備技術(shù)為工業(yè)化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。N+注入可能是一種有效的富鉻酵母選育方法。 通過對(duì)N+注入酵母細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)研究發(fā)現(xiàn)：離子束對(duì)酵母細(xì)胞有直接刻蝕損傷作用，菌體成活率隨注入劑量的增

4、加呈先降、后升、再降的“馬鞍型”變化關(guān)系。SEM觀察發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)N+注入的細(xì)胞較為完整、飽滿且表面光滑，而經(jīng)注入后的細(xì)胞表面粗糙，可見明顯的刻蝕損傷和破壁現(xiàn)象，并且注入劑量越大，傷痕也越深寬。在培養(yǎng)過程中，經(jīng)平板單菌落和顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)離子注入后的酵母菌落和細(xì)胞形態(tài)與原始菌比較，均有明顯的變化。 本實(shí)驗(yàn)對(duì)富鉻酵母中有機(jī)和無機(jī)鉻進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)篩選菌株Y-6有機(jī)鉻含量達(dá)94.6％，而出發(fā)菌的有機(jī)鉻含量是85％。紫外光譜分析，高鉻酵母在