促孕復(fù)方有效組分DS147的質(zhì)量控制及促進(jìn)著床作用機(jī)制研究.pdf

1、DS147是從臨床經(jīng)驗(yàn)方促孕復(fù)方通過醇提后乙酸乙酯萃取并通過藥理實(shí)驗(yàn)篩選得到的具有促進(jìn)胚胎著床作用的中藥復(fù)方有效組分，該復(fù)方由黃芪、黃芩、白術(shù)和續(xù)斷組成。中藥質(zhì)量控制是中藥研究熱點(diǎn)，也是中藥現(xiàn)代化發(fā)展的中藥敲門磚，指紋圖譜是質(zhì)量控制研究的重要手段。本課題以HPLC指紋圖譜分析方法為主，對(duì)DS147進(jìn)行質(zhì)量控制研究。另外，本課題通過檢測(cè)小鼠正常組模型組和給藥組子宮組織蛋白質(zhì)表達(dá)差異的變化，用蛋白組學(xué)激光捕捉顯微切割技術(shù)-二維電泳-質(zhì)譜（l

2、aser capture microdissection-double dimension Electrophoresis-Mass spectum，LCM-DE-MS）技術(shù)路線研究分析DS147作用前后在子宮組織細(xì)胞中受調(diào)節(jié)的蛋白分子，以期篩選得到DS147促進(jìn)著床，調(diào)控著床的關(guān)鍵分子，從而為深入準(zhǔn)確闡明其藥效作用的分子調(diào)控機(jī)制和作用靶點(diǎn)。
　　1.促孕復(fù)方有效組分DS147指紋圖譜及質(zhì)量研究
　　利用HPLC指紋圖譜對(duì)復(fù)

3、方DS147進(jìn)行質(zhì)量控制，經(jīng)過多次探索，確定流動(dòng)相系統(tǒng)為甲醇-水溶液，梯度洗脫，流速0.8mL/min。紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為234nm，運(yùn)行時(shí)間120min。以此建立了復(fù)方DS147指紋圖譜分析方法，獲得了復(fù)方DS147指紋圖譜，找到13個(gè)色譜峰作為共有指紋峰。這些指紋峰特征性強(qiáng)，可以用來作為整體評(píng)價(jià)復(fù)方質(zhì)量的指標(biāo)。通過對(duì)照品的HPLC色譜圖保留時(shí)間與指紋圖譜的比較，確定2、6、9、10、12、13號(hào)峰分別是指標(biāo)性成分獐牙菜苷、毛蕊異黃酮、芒

4、柄花苷、芒柄花素、漢黃芩素、白術(shù)內(nèi)酯II，并計(jì)算了這6個(gè)指標(biāo)性成分的含量。初步建立了復(fù)方DS147質(zhì)量評(píng)價(jià)的方法。
　　2.促孕復(fù)方有效組分DS147促著床機(jī)制研究
　　分別利用超排卵模型和吲哚美辛模型造模，自著床后開始灌胃給予DS147，給藥5天后頸椎脫臼處死動(dòng)物，取出子宮組織迅速投入液氮中保存。將液氮凍存的子宮組織粉碎，進(jìn)行雙向凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，染色，掃描膠條，分析凝膠電泳圖，進(jìn)行蛋白質(zhì)差異化比較，得到含量改變的蛋白質(zhì)，選取

5、有顯著性變化的蛋白質(zhì)點(diǎn)做質(zhì)譜分析。分析表明，正常（CN）組、超排卵模型（CM）組和超排卵模型中藥（CZ）組有15種蛋白質(zhì)表達(dá)發(fā)生明顯改變。和CN組相比，CM組有3種蛋白質(zhì)明顯表達(dá)下調(diào)，CZ組較之CM組明顯表達(dá)上調(diào)；有12種蛋白質(zhì)CM組較之CN組明顯上調(diào)，但是CZ組較之CM組明顯下調(diào)。正常（IN）組、吲哚美辛模型（IM）組和吲哚美辛中藥（IZ）組有23種蛋白質(zhì)表達(dá)發(fā)生明顯改變，和IN組相比，有7種蛋白質(zhì)IM組較之IN組明顯下調(diào)，但是IZ組