近紅外中位氨基酸取代Cy7的合成及生物應(yīng)用.pdf

1、隨著生命科學(xué)的發(fā)展，迫切需要高靈敏度的分析檢測(cè)方法。生物分子的熒光標(biāo)記是繼同位素標(biāo)記后出現(xiàn)的快速方便的生物分子分析手段。二十世紀(jì)八十年代中期發(fā)展起來的基于熒光標(biāo)記的DNA自動(dòng)測(cè)序技術(shù)，已經(jīng)成為生命科學(xué)研究的重要里程碑。但目前仍需要在熒光分析靈敏度和可靠性上進(jìn)一步提高。七甲川菁染料作為近紅外熒光染料，由于能有效避開生物樣品的自吸收和自發(fā)熒光所造成的背景干擾，近來常被用作生物體內(nèi)的熒光標(biāo)記物或制成熒光探針，成為研究熱點(diǎn)。 本論文在總

2、結(jié)前人工作的基礎(chǔ)上，合成了一個(gè)兼顧染料的光穩(wěn)定性和水溶性的七甲川吲哚菁染料。以這個(gè)染料為母體，對(duì)其中位氯原子進(jìn)行取代，合成處中位直鏈氨基酸取代的新型近紅外菁染料。其在斯托克斯位移這一關(guān)鍵的光譜性能上取得突破，斯托克斯位移超過140nm，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于普通多甲川菁染料的25nm。 設(shè)計(jì)的母體染料在兩端N原子上引入一個(gè)空間位阻的芐基以提高光穩(wěn)定性。光穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)染料在水溶液中的光氧化速度明顯比其他溶劑快。母體染料的合成以甲苯代替苯作為溶

3、劑，在乙醇與丙酮的混合溶劑中進(jìn)行二次重結(jié)晶，使產(chǎn)率和純度都好于在水中重結(jié)晶，為后續(xù)工作奠定了基礎(chǔ)。 將母體染料的中位氯原子用氨基酸試劑親核取代，衍生合成了兩個(gè)中位氨基酸取代的七甲川菁染料。它們具有大的斯托克斯位移，其中在水溶液中的斯托克斯位移大于140nm。研究了所合成染料的吸收和熒光光譜，測(cè)定了吸收和發(fā)射性能，考查了溶劑、粘度、溶液pH值和樣品濃度對(duì)其光譜性能的影響。 選擇用近紅外七甲川菁染料2b嘗試進(jìn)行蛋白質(zhì)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)