羅漢果皂甙類化合物的分離、純化及其抗氧化活性研究.pdf

1、羅漢果是我國特有的經(jīng)濟(jì)、藥用植物。本文以羅漢果鮮果為原料，研究了羅漢果中皂甙成分的提取分離純化工藝以及不同貯藏時間下羅漢果不同部位皂甙成分含量的變化，運用紫外光譜儀、高效液相色譜儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、生物化學(xué)發(fā)光儀等儀器，對羅漢果中皂甙成分的含量測定、結(jié)構(gòu)分析以及生物活性進(jìn)行了初步的研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1、羅漢果皂甙提取、分離工藝的研究
　　采用乙醇回流浸提法提取羅漢果中的皂甙。通過考察乙醇濃度、料液比、提取溫度三個因素

2、對羅漢果皂甙提取量的影響，結(jié)合旋轉(zhuǎn)正交實驗設(shè)計，最終確定提取羅漢果皂甙的最佳提取工藝條件為:乙醇濃度71.16％(v/v)，料液比1∶34.65(g/mL)，提取溫度71.54℃，在該條件下，羅漢果皂甙的提取量為9.38％，其中總皂甙的得率為93.78％。
　　考察了大孔樹脂LXA-8對羅漢果乙醇提取物的分離情況，得到最佳柱分離條件為:在常溫下依次用水、60％的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集60％的乙醇洗脫液，經(jīng)濃縮冷凍干燥可得羅漢果皂甙

3、粗提取，產(chǎn)品的得率為49.26％，其中羅漢果總皂甙的得率為73.21％。
　　2、羅漢果中皂甙類化合物的分析與測定
　　建立了羅漢果皂甙提取物的高效液相分析方法。色譜條件為:色譜柱，Waters Sunfire TM C18(4.6mm×150mmI.D.5μm);柱溫，25℃;流動相為0.1％(v/v)的磷酸水(A)和乙腈(B)，梯度洗脫程序為:0～10min:10％-17％B;10～20min:17％B;20～30min

4、:17％-20％B;30～40min:20％;40～50min:20％-23％B;50～60min:23％B;60～70min:23％-26％B;70～80min:26％B;流速，0.8mL/min;檢測波長為203nm。結(jié)果顯示此方法可以用來同時分析羅漢果中皂甙ⅡA2、皂甙Ⅲ、甙Ⅳ、11-O-甙Ⅴ、甙Ⅴ和甙Ⅵ的含量，且線性關(guān)系、精密度和重復(fù)性好，回收率高。
　　分析了室溫下貯藏0d、7d和14d的60d日齡羅漢果鮮果種子、果皮和

5、果肉中皂甙含量的變化，結(jié)果顯示，羅漢果皂甙主要存在于果皮和果肉中，種子中含量很少，果肉中的含量大于果皮。羅漢果鮮果中皂甙ⅡA2含量極少，皂甙Ⅴ含量最多。隨著貯藏時間的延長，羅漢果中苦甙的含量逐漸減少，甜甙含量逐漸增加。貯藏7d后，羅漢果中皂甙ⅡA2逐漸消失，皂甙Ⅲ、甙Ⅳ、11-O-甙Ⅴ、甙Ⅴ和甙Ⅵ的含量增加。貯藏14d后，甙Ⅲ、甙Ⅳ的含量降低，11-O-皂甙Ⅴ的含量幾乎沒有變化，甙Ⅴ和甙Ⅵ的含量逐漸增加。
　　3、羅漢果皂甙類化合

6、物的制備和結(jié)構(gòu)鑒定
　　采用旋轉(zhuǎn)正交法優(yōu)化的工藝，大規(guī)模地提取羅漢果皂甙類化合物，將分離后的羅漢果粗提物粉末，通過大孔樹脂LXA-8多級硅膠柱層析、凝膠柱(SephadexLH-20)層析以及HP-20SS柱層析后，所制備的5個級分經(jīng)UV、HPLC和HPLC-ESI/MS/MS分析，初步推斷可能為羅漢果皂甙ⅡA2、羅漢果皂甙Ⅲ、羅漢果皂甙Ⅳ、11-O-羅漢果皂甙Ⅴ、羅漢果皂甙Ⅵ，且純度較高。
　　4、羅漢果皂甙類化合物的抗氧

7、化活性研究
　　采用化學(xué)發(fā)光法研究了羅漢果甙類化合物對活性氧自由基(ROS)的清除能力，研究結(jié)果表明，在三個抗氧化體系中，羅漢果皂甙粗提物對三種自由基都表現(xiàn)了較高的清除能力，抗氧化效果幾乎與VC相同。其他六種羅漢果皂甙，在不同的體系清除自由基的能力不同。在超氧陰離子和過氧化氫體系中，六種羅漢果皂甙的清除能力由高到低依次為:羅漢果皂甙Ⅵ、羅漢果皂甙Ⅴ、羅漢果皂甙Ⅲ和羅漢果皂甙Ⅳ、11-O-皂甙Ⅴ、羅漢果皂甙ⅡA2。在羥基自由基體系中