高產(chǎn)乳糖酶酵母菌篩選、培養(yǎng)基優(yōu)化及酶的分離提純.pdf

1、選取分離自內(nèi)蒙古錫盟地區(qū)酸馬奶酒中的14株酵母菌，通過定性、定量測定其產(chǎn)酶能力研究了其產(chǎn)乳糖酶特性。經(jīng)初篩復篩后篩選出一株高產(chǎn)乳糖酶菌株J2，并對其培養(yǎng)基通過單因素及正交試驗進行了優(yōu)化。在優(yōu)化所得培養(yǎng)基條件下對J2產(chǎn)酶及生長規(guī)律進行了研究，在此基礎(chǔ)上對粗酶液進行了酶的分離純化的研究。
　　初篩高產(chǎn)乳醣酶菌株利用X-gal和ONPG發(fā)酵管定性試驗，結(jié)果表明兩種定性方法結(jié)果一致，最終獲得8株產(chǎn)酶菌株為J2、J8、J13、J14、J16

2、、J20、J21、J24。此外，兩種方法一致也表明ONPG微量生化鑒定管法同樣可以用于鑒定真菌是否具有產(chǎn)乳糖酶能力。復篩通過測定8株陽性菌胞內(nèi)及胞外酶活力，結(jié)果顯示J2與J21發(fā)酵上清液酶活力達到140.9U/ml，55.24U/ml，而其它菌株酶活力均較低。同時運用冰浴超聲波、-80℃凍融三次及-20℃過夜三種方法破壁對J2與J21的產(chǎn)酶方式進行了研究，以排除破壁方法的影響。結(jié)果表明J2、J21的產(chǎn)酶方式確為胞外分泌。
　　通過

3、對MI培養(yǎng)基碳源、氮源和金屬離子種類及添加水平進行單因素試驗后做了正交試驗，得到最利于產(chǎn)酶配方為:乳糖與蔗糖以1∶1加入，含量共為1％，尿素與蛋白胨以3∶7加入，含量為0.5％，酵母粉1％，MgSO4為0.05％。培養(yǎng)基優(yōu)化后J2的產(chǎn)酶能力從140U/mL提高到了400U/mL以上，增加了將近3倍。后又在優(yōu)化所得培養(yǎng)基中對J2的產(chǎn)酶及生長規(guī)律作了研究。結(jié)果表明J2在24h后開始產(chǎn)酶，36h達最高，至60h后發(fā)酵液中酶活力基本降為0。