乳糖酶的基因克隆.pdf

1、本論文從乳品菌種發(fā)酵劑[(Dairy Starter Culture)：保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌1∶1]中分離純化得到保加利亞乳酸桿菌(L.delbrueckii bulgaricus)，并對該菌產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶進(jìn)行了研究，包括該酶的酶學(xué)性質(zhì)的分析，β-半乳糖苷酶基因的克隆，β-半乳糖苷酶基因DNA及其衍生的氨基酸序列分析。 以乳品菌種發(fā)酵劑為出發(fā)混合菌，用脫脂乳為培養(yǎng)基將其活化，根據(jù)保加利亞乳酸桿菌屬于兼性厭氧菌而嗜熱鏈

2、球菌為好氧菌的特性，通過厭氧培養(yǎng)和劃線接種培養(yǎng)的方法，將保加利亞乳酸桿菌分離純化。 制備經(jīng)分離純化的保加利亞乳酸桿菌β-半乳糖苷酶的原酶液。以O(shè)NPG為低物，分別測定了β-半乳糖苷酶最適pH值及pH穩(wěn)定性、最適溫度及熱穩(wěn)定性。該酶最適pH值為6.6～7.4，屬于中性酶，在酸性條件不穩(wěn)定，堿性條件穩(wěn)定；最適反應(yīng)溫度42℃～47℃，熱穩(wěn)定性較差，不適于高溫反應(yīng)。 以分離純化的保加利亞乳酸桿菌的基因組DNA為模板，根據(jù)Prim

3、er Premier 5軟件和已發(fā)表的基因序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR獲得乳糖酶基因片段，并將其克隆到pGEM T-Easy載體上。 從保加利亞乳酸桿菌中克隆得到乳糖酶基因組DNA序列。通過軟件分析保加利亞乳酸桿菌基乳糖酶DNA及其衍生的氨基酸序列，序列分析表明，該基因組DNA長3130bp，GC含量為52.05％，DNA編碼區(qū)長3024bp，GC含量為52.51％。氨基酸序列中800～840位之間含有一個(gè)典型的疏水區(qū)域，700～7