幾種水產(chǎn)動植物中脂肪氧合酶的性質(zhì)研究.pdf

1、本文從綠藻條滸苔（enteromorpha clathrata）中用水提法提取脂肪氧合酶（lipoxygenase ，LOX），并經(jīng)Q Sepharose F F陰離子交換層析、Sephacryl S-300 H R凝膠過濾層析等方法進(jìn)行分離純化，得到兩個(gè)組分（LOX-1＃ 和LOX-2＃），經(jīng)SDS-PAGE電泳后各顯示單一的蛋白條帶，分子量分別為102.0和79.0 kDa。部分酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明LOX-1＃、LOX-2＃ 都有著

2、較好的熱穩(wěn)定性，最適溫度分別為30、25℃；在pH6.0～10.0區(qū)間穩(wěn)定性良好，最適pH分別為10.0和8.6。底物特異性研究表明LOX-1＃ 、LOX-2＃ 對底物的親和性依次為亞油酸>花生四烯酸>亞麻酸，以亞油酸為底物時(shí)，Km值分別為0.23mM、0.20mM。BHA、BHT、TBHQ等抗氧化劑對LOX-1＃ 、LOX-2＃ 有一定的抑制作用，Ca2+對LOX有明顯的激活作用，而Hg2+對LOX有顯著的抑制作用，其它金屬離子影響較

3、小。 用羥基磷灰石柱層析法對尼羅羅非魚鰓組織脂肪氧合酶進(jìn)行了初步純化，純化倍數(shù)達(dá)到了15.26倍，回收率為75.13﹪。對酶的部分性質(zhì)研究表明，最適溫度為30℃，最適pH分別為10.0和4.0，可能存在著兩種或以上的同工酶形式。因此，分別在兩個(gè)pH條件下對該酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。以亞油酸為底物時(shí)，在pH10.0的條件下，最適底物濃度為2.5 10-4M，Km值為0.073 mM。EDTA對該酶有較強(qiáng)的抑制作用。而在pH4.0的

4、條件下，最適底物濃度為5 10-4M，Km值為2.71mM。底物特異性研究結(jié)果表明在pH4.0的條件下該酶更傾向于親和亞麻酸；而在pH10.0時(shí)對底物的親和力大小依次為亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸。 同樣用羥基磷灰石柱層析法對南美白對蝦血淋巴脂肪氧合酶進(jìn)行了初步純化和部分酶學(xué)性質(zhì)研究。酶的最適溫度為25℃，最適pH為9.6，酶活相對較低，分別為羅非魚鰓組織LOX活力的28.05﹪，滸苔LOX-1＃、LOX-2＃ 活力的0.26﹪和

5、0.20﹪。以亞油酸為底物時(shí)，最適底物濃度為2.5×10<'-4>M，Km值為0.5 mM，Vmax值為1.67 103 U/mg protein.min。加入1mM的谷胱苷肽大大提高了酶液的穩(wěn)定性。底物特異性研究結(jié)果表明酶對不同不飽和脂肪酸的親和力依次為C20：4>C18：2>C18：3。 用正相液相色譜對上述三種來源的LOX催化亞油酸甲酯形成的氫過氧化物進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，滸苔LOX-1＃ 催化亞油酸甲酯氧化主要形成9-氫