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1、本研究通過對(duì)產(chǎn)低溫蛋白酶菌株的篩選及酶學(xué)特性研究，試驗(yàn)結(jié)果如下:
1.從新疆冰川高寒地區(qū)阿勒泰進(jìn)山口植物根際凍土中分離出一株產(chǎn)低溫蛋白酶菌株，通過平板菌落形態(tài)及顯微鏡形態(tài)結(jié)合生理生化鑒定，初步鑒定這一株菌為沙雷氏菌（Serratia sp.）。對(duì)菌株A29-2的16S rDNA序列進(jìn)行同源性分析，鑒定結(jié)果為:菌株A29-2與標(biāo)準(zhǔn)菌株NR042356.1在同一支系，相似率達(dá)到99％，故菌株A29-2鑒定為沙雷氏菌（Serrati
2、a ureilytica strain NiVa51），與傳統(tǒng)鑒定相統(tǒng)一。
2.對(duì)冰川細(xì)菌Serratia sp.A29-2發(fā)酵產(chǎn)低溫蛋白酶條件進(jìn)行優(yōu)化，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化培養(yǎng)基成分和相應(yīng)曲面法優(yōu)化發(fā)酵條件，研究結(jié)果為:最佳培養(yǎng)基組成為蛋白胨15.0g/L、酵母粉5.0g/L、麥芽糖10.0g/L、CaCl20.5g/L。在此基礎(chǔ)上優(yōu)化發(fā)酵條件，最優(yōu)發(fā)酵溫度22℃、發(fā)酵時(shí)間60h、初始pH值7.0、NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.00％，
3、測(cè)得發(fā)酵液的酶活力54.25 U/mL，初始酶活力為28.17 U/mL，比初始酶活力提高了48.07％。
3.對(duì)冰川細(xì)菌Serratia sp.A29-2產(chǎn)胞外蛋白酶進(jìn)行分離、提取。通過(NH4)2SO4分級(jí)沉淀、透析脫鹽、SDS-PAGE電泳，結(jié)果得到此蛋白酶的分子量為45～66.2KDa。并對(duì)該菌株產(chǎn)低溫蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)一步研究，結(jié)果表明:該酶最適反應(yīng)溫度40℃，最適反應(yīng)pH7.0，Ca2+對(duì)該酶有顯著的激活作用，F(xiàn)e3
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