海洋細(xì)菌復(fù)合酶高產(chǎn)菌株的篩選、產(chǎn)酶及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、海洋中存在著種類繁多的微生物類群，是獲取新藥和新酶的寶貴資源，具有很好的開發(fā)前景。極端環(huán)境微生物是微生物學(xué)領(lǐng)域中研究的熱點(diǎn)，適冷菌是極端微生物中的一類，在海洋中廣泛分布，是分離適冷酶的良好材料。適冷酶在低溫下具有較高的催化效率，在需要低溫催化的行業(yè)如洗滌、食品、奶制品、皮革加工、醫(yī)藥和化妝品中具有較高的應(yīng)用價(jià)值，因而引起各國科學(xué)家的廣泛關(guān)注。 本文通過透明取法初篩，得到產(chǎn)淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶復(fù)合酶的菌株3株。然后通過搖瓶液態(tài)發(fā)

2、酵和產(chǎn)酶測定，篩選出一個比較優(yōu)異的復(fù)合酶產(chǎn)生菌株-1-3。 對菌株1-3進(jìn)行鑒定，菌株的表型、生理生化特征和16SrDNA序列結(jié)果表明這株菌株屬于假單胞菌屬，命名為Pseudomona sp.1-3。 分別研究了不同碳源、氮源、無機(jī)鹽、脂肪酶作用底物、接種量、培養(yǎng)基起始pH、以及培養(yǎng)溫度和時(shí)間對1-3發(fā)酵產(chǎn)酶的影響，發(fā)現(xiàn)氮源、碳源有利于菌體產(chǎn)酶，蛋白胨可作為菌體產(chǎn)酶的最佳氮源，產(chǎn)復(fù)合酶活力最高；當(dāng)以1％的葡萄糖作為碳源時(shí)

3、，菌體產(chǎn)復(fù)合酶能力增強(qiáng)；金屬離子Ca2+、K+對酶有不同程度的激活作用；添加油脂對產(chǎn)復(fù)合酶的影響不大；接種量為10％時(shí)，菌株產(chǎn)酶能力最強(qiáng)，接種量增加，產(chǎn)酶能力下降；培養(yǎng)基初始pH值在6-11時(shí)對產(chǎn)酶影響不大，在pH8.5時(shí)產(chǎn)復(fù)合酶能力最強(qiáng)。通過摸索不同發(fā)酵溫度和時(shí)間，發(fā)現(xiàn)該菌在28℃培養(yǎng)72h可達(dá)最大產(chǎn)酶值。 在搖瓶發(fā)酵水平上進(jìn)行產(chǎn)酶優(yōu)化試驗(yàn)，確定1-3產(chǎn)復(fù)合酶的最佳培養(yǎng)方案為：以1％葡萄糖為碳源，以0.5％蛋白胨為氮源，無機(jī)鹽

4、：0.075％KH2PO4、0.02％MgSO4、0.5％CaCO3，起始pH值為8.5，接種量為10％，28℃、150r/min的條件下在搖床中培養(yǎng)72h。 對1-3的粗酶酶液，進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究。淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的最適反應(yīng)溫度分別為30℃、40℃和45℃；淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶的最適pH值分別為6.0、9.0和9.0。淀粉酶30℃溫浴30min后仍有80％以上的酶活，脂肪酶在40℃下保溫60min，酶活力仍有80％左右，