環(huán)境因子對(duì)微擬球藻脂質(zhì)代謝及其硫脂酶轉(zhuǎn)錄水平的影響.pdf

1、隨著人口的增長(zhǎng)和世界經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，化石能源的消耗日益加劇。為解決由此帶來的能源危機(jī)和環(huán)境問題，世界各國(guó)不得不加快開發(fā)化石能源的替代燃料。近年來，生物柴油做為一種清潔可再生能源受到越來越多的重視。生物柴油雖然優(yōu)點(diǎn)眾多，但其傳統(tǒng)原料可能會(huì)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品價(jià)格、糧食安全產(chǎn)生影響。因此，選擇一種低廉的、安全的原料來生產(chǎn)生物柴油是發(fā)展的總趨勢(shì)。
　　微擬球藻(Nannoc hloropsis）屬于真眼點(diǎn)藻綱(Eustigmatophyceae)，

2、是一類重要的單細(xì)胞經(jīng)濟(jì)微藻。它富含蛋白質(zhì)、多不飽和脂肪酸、色素等高附加值產(chǎn)物，且光合效率高、環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)，油脂含量可以達(dá)到細(xì)胞干重的30％，能夠進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，被認(rèn)為是生產(chǎn)生物柴油頗具前景的原料。盡管微藻做為生物柴油的原料有其它原料不可比擬的優(yōu)勢(shì)，但天然微藻脂肪酸的飽和度和長(zhǎng)度并不適合生物柴油的生產(chǎn)。近年來，通過改變培養(yǎng)基組成、控制培養(yǎng)條件以及基因工程法提高微藻油脂含量和脂肪酸質(zhì)量成為生物柴油研究的熱點(diǎn)。
　　實(shí)驗(yàn)包括以下兩個(gè)部分

3、:
　　第一部分:分析微擬球藻cDNA文庫，從微擬球藻中分離出一條硫脂酶基因的cDNA全長(zhǎng)，命名為No TE。NoTE全長(zhǎng)1，314 bp，編碼437個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量為55 kD。將該基因連接到原核表達(dá)載體pET-30a上，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá)進(jìn)行功能的初步驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，表達(dá)NoTE并未改變大腸桿菌的脂肪酸組成，但其C14∶1、C16∶0、C16∶1、C18∶1及總脂肪酸含量較不含重組質(zhì)粒菌株

4、分別提高了11％、18％、32％、49％和30％，證明克隆的硫脂酶基因能在大腸桿菌中表達(dá)并具有相應(yīng)的酶活性。
　　第二部分:探究了限氮、限磷及不同溫度對(duì)NoTE轉(zhuǎn)錄水平及微擬球藻總脂含量、脂肪酸組成的影響。限氮處理組結(jié)果顯示，NoTE轉(zhuǎn)錄水平及油脂含量隨限氮時(shí)間的延長(zhǎng)而提高;在對(duì)脂肪酸組成的影響上，氮缺乏可以抑制多不飽和脂肪酸的合成，促進(jìn)飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸的合成。限磷處理得到了與限氮處理相同的結(jié)論。溫度處理組結(jié)果顯示，隨溫