2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩59頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、研究背景:
  肝功能衰竭(hepatic failure)是指肝細胞受到廣泛、嚴重的損害,機體代謝功能發(fā)生嚴重紊亂而出現(xiàn)的臨床綜合癥狀。常伴有大量肝細胞壞死,血氨的惡性升高,嚴重的消化道癥狀,黃疸迅速加深,出血,腦水腫和肺水腫甚至肝性腦病(hepatic encephalopathy)。此綜合征病情嚴重、臨床癥狀復雜、病死率高,是嚴重的危害人們健康的肝臟疾病。其中肝性腦病是肝硬化失代償期和肝功能衰竭的重要并發(fā)癥之一,以代謝紊亂為

2、基礎的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)的綜合病征,其主要臨床表現(xiàn)是意識障礙、行為失常和昏迷。而代謝紊亂引起的氨中毒學說一直在肝性腦病的發(fā)病機制中處于核心地位。同時,血氨在肝性腦病的診斷、治療中也有十分重要的作用。
  膽紅素作為一種生理性代謝產(chǎn)物并非絕對無用,許多臨床及動物實驗都證實膽紅素可作為機體的抗氧化物質(zhì)發(fā)揮極強的抗氧化作用[1]。膽紅素對脂類的抗氧化作用可以起到補充谷胱甘肽的作用。然而膽紅素通過肝臟UGT1A1的分解代謝對膽紅素的抗氧

3、化特性起決定性作用。Notas等的研究結果顯示,肝硬化早期肝代償功能活躍,隨著膽紅素的增加,機體抗氧化功能呈增強的趨勢,說明膽紅素與機體抗氧化系統(tǒng)的潛在聯(lián)系[2]。另外,膽紅素還具有抗脂質(zhì)過氧化、抗炎、抑制細胞凋亡等作用。膽紅素通過UGT酶催化的葡萄糖醛酸化作為肝臟代謝內(nèi)源性物質(zhì)最普遍的結合反應具有重要病理生理意義。目前證據(jù)提示氨可以作用于線粒體中三羧酸循環(huán)和蘋果氨酸、天冬氨酸穿梭酶,導致ATP合成不足,發(fā)生氧化應激[21]。氧化應激主

4、要通過啟動膜脂質(zhì)過氧化改變生物膜功能、與生物大分子共價結合及破壞酶的活性等。在細胞因子(如TNF-α,NF-κB)的共同作用下引起不同程度的肝損傷,所以抗氧化治療對防治肝臟疾病起著重要的作用[3]。
  活性氧類物質(zhì)(Reactive oxygen species,ROS),通常是生物氧化過程中的副產(chǎn)物,由于分子中存在未配對的電子,所以十分活躍。過高的活性氧水平會對細胞和基因結構造成損壞,并且在細胞信號傳導,和保持機體平衡中起很大

5、作用。然而在外界環(huán)境影響下如:暴露于紫外線(UV exposure)或熱源(heat exposure)下等,ROS的量會急劇增多,造成明顯的細胞結構的損壞,這種現(xiàn)象被稱為氧化應激。最近的研究表明氨可誘導星形膠質(zhì)細胞中活性氧的產(chǎn)生[4]。在急性氨中毒的動物模型中也顯示出超氧化物產(chǎn)生的增加和各種抗氧化酶活性的下降[5]。氧化應激的后果之一就是導致線粒體內(nèi)膜上以鈣離子依賴為特征的mPTP孔的開放。血氨作為一種生理性產(chǎn)物在病理條件下的惡性增高

6、必然導致其在肝臟內(nèi)的堆積,肝細胞內(nèi)升高的氨濃度勢必會作為一種病理性的毒物影響肝細胞的代謝。
  目前,國內(nèi)外關于血氨升高如何引起星狀膠質(zhì)細胞形態(tài)改變機制的研究較多,包括有直接毒性作用,氧化應激作用,線粒體通透性轉(zhuǎn)變和谷氨酰胺等學說。但是關于氨對肝細胞的毒性,尤其是肝臟中酶的活性的影響研究甚少;在我們之前的臨床研究治療中發(fā)現(xiàn):肝衰竭過程中出現(xiàn)明顯的血氨及膽紅素升高,降氨后膽紅素亦下降。在治療急性肝衰竭和肝硬化基礎上的慢加急性肝衰竭時

7、,早期、全程聯(lián)合應用降血氨藥物能夠顯著緩解患者的肝臟損傷、降低患者死亡率、改善患者預后。膽紅素的代謝過程中步步都涉及到能量的消耗,而在許多肝性腦病模型中都證實氨對線粒體氧化損傷及能量代謝的干擾,故推測氨可能通過氧化損傷影響膽紅素代謝相關的酶或者是阻斷肝細胞的能量供給來阻斷膽紅素的代謝,從而導致膽紅素在體內(nèi)的堆積。而高血氨狀態(tài)下出現(xiàn)的膽紅素水平的升高亦可能是組織處于氧化應激狀態(tài)的標志。本實驗通過高血氨動物模型和氨中毒細胞模型的建立,揭示氨

8、對肝細胞氧化損傷及對膽紅素代謝的阻礙作用,為臨床治療急慢性肝衰竭中早期、全程聯(lián)合應用降氨藥物提供理論依據(jù)。
  研究目的:
  1.建立高血氨動物模型,檢測膽紅素代謝相關的酶HO-1和UGT1A1及NF-κB通路的激活情況;
  2.培養(yǎng)人正常的肝細胞changliver,濃度梯度的氯化銨處理后檢測ROS和ATP的變化,進一步闡明氨對肝臟的氧化損傷及能量代謝的干擾,證實氨與肝細胞氧化損傷的相關性;
  研究方法:

9、
  (1)高血氨動物模型:
  1.ELISA檢測大鼠血清總膽紅素(TBIL),直接膽紅素(DBIL)水平;
  2.RT-PCR法檢測UGT1A1的mRNA的變化;
  3.免疫組織化學染色檢測HO-1和NF-κB的表達。
  (2)氨中毒的細胞模型
  1.MTT法檢測氨對肝細胞的毒性;
  2.TUNEL法測定NH4CL作用后肝細胞的凋亡;
  3.ELISA法測細胞上清液中DBI

10、L,GSSH,GSH水平的變化;
  4.鉬磷酸比色法檢測ATP的生成量;
  5.生化自動分析儀測定加入ATP后細胞內(nèi)DBIL的水平;
  6.Westernblot檢測HO-1和UGT1A1的蛋白表達量的差異;
  7.熒光定量PCR檢測HO-1和UGT1A1的mRNA的變化;
  8.電鏡下觀察線粒體形態(tài)的損傷;
  9.流式細胞技術觀測ROS產(chǎn)生的多少。
  結果:
  動物實驗中

11、,高血氨組大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST較對照組明顯升高,P<0.001,差異具有統(tǒng)計學意義;高血氨組的HO-1的組織蛋白表達升高,NF-κB的核轉(zhuǎn)移增加;UGT1A1mRNA水平升高約為對照組的186%。
  細胞實驗中,10mmol幾的氯化銨組細胞上清液中DBIL和GSH水平較對照組下降;胞內(nèi)DBIL量較對照組升高;ATP的生成量下降;10mmol/L的氯化銨處理組在24小時ROS的產(chǎn)生顯著增加并可見線粒體損傷;U

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論