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文檔簡介
1、酸性α-淀粉酶的最適作用pH范圍為4-5,在酸性條件下保持高活性,可以滿足酸性條件下淀粉原料深加工工藝的要求,具有較大的應(yīng)用前景。本論文從黑曲霉中將編碼酸性α-淀粉酶的基因克隆并實(shí)現(xiàn)了將其在畢赤酵母SMD1168中的高效分泌表達(dá),并測(cè)定了重組酶的酶學(xué)性質(zhì)。
以黑曲霉基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增出酸性α-淀粉酶的結(jié)構(gòu)基因,將此基因插入載體pPIC9K,構(gòu)建表達(dá)載體pPIC9K-asAA,并轉(zhuǎn)化畢赤酵母SMD1168,通過G
2、418平板篩選高拷貝轉(zhuǎn)化子,轉(zhuǎn)化子表型為His+Mut+。
在畢赤酵母α-Factor及AOX1基因啟動(dòng)子和終止信號(hào)的調(diào)控下,酸性α-淀粉酶大量表達(dá)并分泌到胞外。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,確定最佳誘導(dǎo)條件為:甲醇濃度2％,誘導(dǎo)pH6.0,誘導(dǎo)溫度28℃,誘導(dǎo)時(shí)間168 h。在此條件下,發(fā)酵上清液中重組酶活可達(dá)3248 U/mL。在同等發(fā)酵時(shí)間72 h下,重組畢赤酵母酸性α-淀粉酶酶活是黑曲霉原始菌株的4.6倍。
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