四氫嘧啶類化合物ZL-5010抗炎免疫藥理活性研究.pdf

1、目的:以丁炔二酸二乙酯、環(huán)己胺及甲醛為原料,合成四氫嘧啶類化合物ZL-5010,探討其抗炎免疫藥理活性。
　　 方法:以丁炔二酸二乙酯、環(huán)己胺及甲醛為原料,醋酸為催化劑,在乙醇溶劑中經氨基化作用、Mannich反應、親核加成反應和脫氫環(huán)化反應等一步法合成多取代四氫嘧啶類化合物ZL-5010(1,3-二環(huán)己基-1,2,3,6-四氫嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯),經制備型硅膠薄層色譜分離純化。MTT法檢測正常小鼠脾細胞的代謝活力；EL

2、ISA法檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細胞介素1(IL-1 beta)的含量。采用角叉菜膠誘導的大鼠足趾腫脹模型及二甲苯誘導的小鼠耳廓腫脹模型評價化合物ZL-5010對急性炎癥的抑制作用。采用醋酸誘導的小鼠扭體實驗和小鼠熱水浴甩尾模型觀察其鎮(zhèn)痛活性。
　　 結果:合成的四氫嘧啶類化合物ZL-5010為無色透明油狀物質,化學式為:1,3-二環(huán)己基-1,2,3,6-四氫嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯,產率為82.7％,其結構通過1

3、H-NMR和MS得到確證,與文獻報道相符?；衔颶L-5010在20、10、5μg/ml濃度下均能抑制正常小鼠脾細胞的代謝活力,平均抑制率分別為64.5％、52.1％、18.9％,與空白對照組比較有統(tǒng)計學差異(P=0.000,P=0.000,P=0.036),IC50為11.95μg/ml；化合物ZL-5010(25,12.5,6.25μg/ml)均能顯著抑制正常小鼠脾細胞分泌細胞因子TNF-α,與對照組比較有統(tǒng)計學差異(P值均為0.0

4、00)；化合物ZL-5010在25、12.5、6.25μg/ml下均能顯著抑制LPS刺激的小鼠脾細胞分泌細胞因子IL-1beta,與細菌脂多糖(LPS)組比較有統(tǒng)計學差異(P=0.000,P=0.000,P=0.001)；且有一定的濃度依賴趨勢?；衔颶L-5010中、高劑量(100、200 mg/kg.b.w)均能明顯抑制二甲苯誘導的小鼠耳廓腫脹,平均耳廓腫脹抑制率分別為42.0％、50.4％,與溶媒對照組比較有顯著差異(P=0.00

5、0,P=0.000)?；衔颶L-5010高、中(200,100mg/kg)劑量組及Aspirin(200mg/kg)組大鼠平均足趾腫脹度分別為0.044ml、0.069ml、0.090ml,均低于溶媒對照組大鼠足趾腫脹度,與溶媒對照組比較有統(tǒng)計學意義(P=0.000,P=0.002,P=0.009)；化合物ZL-5010低劑量組大鼠平均足趾腫脹度為0.119,低于溶媒對照組,但與溶媒對照組比較無統(tǒng)計學差異(P=0.071)；化合物ZL

6、-5010高劑量(200mg/kg)組在給藥后3h時對大鼠足趾腫脹度的抑制率最大,最大平均抑制率為93.2％,化合物ZL-5010中劑量(100mg/kg)組在給藥后3h時對大鼠足趾腫脹度抑制率最大,平均抑制率為75.0％,阿司匹林(200mg/kg)組在給藥后5h時對大鼠足趾腫脹度抑制率最大,平均抑制率為64.5％。化合物ZL-5010在100、200mg/kg.b.w劑量下和阿司匹林在200 mg/kg.b.w劑量下能均可顯著減少正

7、常小鼠扭體反應次數(shù),平均扭體反應抑制率分別為46.3％、53.5％、33.5％,與空白對照組比較有顯著性差異(P=0.000,P=0.000,P=0.004)。
　　 結論
　　 1.以丁炔二酸二乙酯、環(huán)己胺及甲醛為原料,經氨基化作用、Mannich反應、親核加成反應和脫氫環(huán)化反應等合成了四氫嘧啶類化合物ZL-5010(1,3-二環(huán)己基-1,2,3,6-四氫嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯),方法具有操作簡單,原料易得,反應條

8、件溫和,反應收率高等優(yōu)點。
　　 2.反應粗產物經制備型硅膠薄層色譜板,以正己烷、乙酸乙酯(V/V為8:1)為展開劑分離純化,方法操作簡單、易行。
　　 3.化合物ZL-5010對正常小鼠脾細胞代謝有抑制作用,可以顯著抑制正常小鼠脾細胞的代謝活力及細胞因子TNF-α的分泌,并且能夠抑制LPS刺激的小鼠脾細胞分泌細胞因子IL-1beta。
　　 4.化合物ZL-5010可以顯著減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù),提示其具有一