富硒米曲霉的發(fā)酵工藝優(yōu)化、硒種態(tài)分析及富硒機(jī)理初步研究.pdf

1、硒是人體必須的微量元素。缺硒會(huì)導(dǎo)致許多疾病的產(chǎn)生，嚴(yán)重影響人體的健康。因此，補(bǔ)硒越來(lái)越受到各界的重視。然而天然食品中的硒含量普遍偏低，不能滿足人體對(duì)硒的需求，而無(wú)機(jī)硒毒性較高、生物利用率低，不易用于食品中，所以通過(guò)微生物合成法，研發(fā)含硒食品具有很好的應(yīng)用前景。
　　本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)實(shí)驗(yàn)室保藏的米曲霉菌株進(jìn)行紫外誘變處理，然后通過(guò)耐硒實(shí)驗(yàn)獲得4株變異米曲霉菌株，接著將4株米曲霉富硒發(fā)酵，比較其富硒值，篩選獲得耐硒、富硒能力強(qiáng)的米曲霉菌株

2、。以此菌株為出發(fā)菌株，進(jìn)行后續(xù)研究。
　　采用響應(yīng)面優(yōu)化法對(duì)影響富硒發(fā)酵的三個(gè)主要因素:接種量、裝液量和轉(zhuǎn)速進(jìn)行優(yōu)化，得到最優(yōu)的發(fā)酵條件:接種量10.64％，裝液量85.4 mL，轉(zhuǎn)速185 r/min，此時(shí)的最大響應(yīng)值米曲霉的富硒值為2.349 mg/g，較出發(fā)菌株提高了5.8％。并且對(duì)最優(yōu)發(fā)酵條件進(jìn)行了驗(yàn)證性試驗(yàn)，三次試驗(yàn)結(jié)果的平均值為2.325 mg/g，比理論最優(yōu)值低了1.02％，說(shuō)明該模型能良好的反應(yīng)實(shí)際發(fā)酵情況

3、　　建立了高效液相色譜法測(cè)定富硒米曲霉中有機(jī)硒形態(tài)的分析方法。采用6mol/L HCl溶液，50℃水解富硒米曲霉48 h，提取樣品中的有機(jī)硒，采用4-氯-3，5-二硝基三氟甲苯(CNBF)對(duì)提取物進(jìn)行衍生，C18反相色譜柱(4.6 mm×250 mm i.d,5μm)分離，以乙腈-水(1∶1，V/V)和pH6.8乙酸-乙酸鈉緩沖液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng):240 nm，測(cè)得富硒米曲霉中有機(jī)硒化合物主要是硒代胱氨酸(SeCys2)，

4、檢出限為(S/N=3)0.68 mg/L，定量限為(S/N=10)2.244 mg/L，線性范圍為5.0-100 mg/L，加標(biāo)回收率為94.8％-105.8％，硒代胱氨酸的含量為1.25mg/g。本方法簡(jiǎn)單，靈敏，重現(xiàn)性好，可適用于富硒米曲霉及相關(guān)產(chǎn)品中有機(jī)硒形態(tài)的檢測(cè)分析。
　　采用斯皮爾曼系數(shù)(r)分析4株變異米曲霉富硒能力與胞內(nèi)谷胱甘肽含量的相關(guān)程度，計(jì)算出r值為0.8，表明本實(shí)驗(yàn)研究的米曲霉富硒能力與胞內(nèi)谷胱甘肽的含量具